免疫共振散射光譜法分析人尿微量白蛋白.pdf

1、第一部分緒論介紹了免疫分析的原理、種類，以及膠體金的制備、表征和膠體金標(biāo)記在免疫分析中的應(yīng)用；綜述了共振散射光譜的有關(guān)理論、特點、分析應(yīng)用及發(fā)展趨勢；介紹了尿微量白蛋白的產(chǎn)生機(jī)理、臨床意義以及分析進(jìn)展。 第二部分簡便快速靈敏測定人尿微量白蛋白的免疫共振散射光譜新方法在pH 4.4的Na2HPO4-C6H8O7緩沖溶液和聚乙二醇(PEG-6000)存在下，尿微量白蛋白(Malb)與羊抗人尿微量白蛋白(Goat anti-Malb)

2、發(fā)生特異性反應(yīng)生成免疫復(fù)合物微粒，導(dǎo)致體系在488nm處的共振散射峰增強(qiáng)。據(jù)此，建立了一個測定Malb的免疫共振散射光譜法。Malb的濃度在O.03～O.96μg／mL的范圍內(nèi)，與488nm處的共振散射強(qiáng)度增加值△I488nm呈線性，呈線性，其回歸方程為：△I488n=116.OC-2.1，相關(guān)系數(shù)為0.9991，檢測限為O.02μg／mLMalb。該方法用于定量分析正常人尿中微量白蛋白，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3-4.6％之間，同時具有簡單

3、、快速的特點，得到的結(jié)果較為滿意。 第三部分快速靈敏檢測人尿微量白蛋白的猝滅型金標(biāo)免疫共振散射光譜探針采用檸檬酸鈉還原法制備了粒徑約為10.Onm的膠體金顆粒，在pH6.5條件下用其標(biāo)記Goatanti-Malb獲得了一個簡便快速靈敏的尿微量白蛋白(Malb)免疫共振光散射光譜探針。在pH為5.2的C6H8O7-Na2HPO4緩沖溶液中及聚乙二醇(PEG-4000)存在下，金標(biāo)記anti-Malb發(fā)生非特異性聚集并在577nm處

4、有一個最強(qiáng)的共振散射峰。在非特異性聚集金標(biāo)記anti-Malb中加入Malb，兩者發(fā)生特異性反應(yīng)生成免疫復(fù)合物并沉降，導(dǎo)致體系在577nm處的共振散射強(qiáng)度急劇降低，Mallb的濃度在4-128ng／mL范圍內(nèi)與共振散射降低值△I1577nm呈線性關(guān)系，回歸方程為△I577nm=703.9CMalb+39.96、相關(guān)系數(shù)0.9983、檢測限為3.2ng／mL，此方法用于檢測人尿樣中的微量白蛋白，結(jié)果滿意。 第四部分免疫納米金催化、

5、氧化亞銅增強(qiáng)共振散射光譜檢測人尿微量白蛋白在pH6.5條件下用金納米顆粒標(biāo)記Goatanti-Malb獲得Malb免疫共振散射光譜探針。本文在pH5.0Na2HP04-C6H8O7緩沖溶液中，Goatanti-Malb發(fā)生非特異性聚集，加入Malb后，Goatanti-Malb與Malb發(fā)生特異性反應(yīng)，生成膠體金標(biāo)免疫復(fù)合物分散于溶液中。以16000rpm高速離心分離后，上清液中含有免疫金或膠體金免疫復(fù)合物，取適量上清液作為催化晶種，在

6、0.69mg／mLCuSO4，1.0mg／mLNaOH(含13.84mg／mL酒石酸鉀鈉)，0.088mg／mL葡萄糖溶液，70℃條件下反應(yīng)6min條件下，催化葡萄糖還原CuSO4生成Cu2O沉積在晶種表面，形成大粒徑的納米復(fù)合物，在610nm處共振散射信號劇急增大。結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)隨著Malb濃度的增大，上層清夜中晶種微粒數(shù)增多，I161nm值增大。Cmalb在0.014-0.43ng／mL范圍內(nèi)與△I610nm存在良好的線性關(guān)