青霉素G的金標記免疫共振散射光譜分析.pdf

1、第一部份：緒論 綜述了金納米微粒的制備、表征及其在生化分析中的應用；綜述了近年來共振散射技術在生化分析中的應用。介紹了青霉素G的分析進展。 第二部份：痕量青霉素的金納米標記免疫共振散射光譜快速檢測在pH8.0條件下，用粒徑為9.0nm的金納米微粒標記兔抗青霉素獲得青霉素金標免疫探針。在pH5.4磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液及聚乙二醇存在下，金標記兔抗青霉素與青霉素G產生特異性結合，并生成膠體金免疫復合物。在PEG作用下膠體

2、金免疫復合物發(fā)生聚集，導致體系在580nm處的共振散射峰增強。青霉素G濃度在7.5ng.mL-1-1.65×103 ng.mL-1范圍內與580nm處的共振散射光強度增加值呈線性，方法的檢出限為0.070ng.mL-1。該法用于定量分析牛奶中的青霉素，簡便快速，結果令人滿意。 第三部份：痕量青霉素G的免疫納米金催化共振散射光譜檢測小粒徑的金、銀和免疫納米金粒子對氯金酸-鹽酸羥胺這一反應具有較強的催化作用?；诮鸺{米微粒在580n

3、m處的共振散射效應及免疫納米金的催化作用，可用它做檢測技術研究該納米反應在生化分析中的應用。我們用粒徑為9.0nm的金納米微粒標記兔抗青霉素抗體。在pH5.4的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，青霉素G與金標兔抗青霉素發(fā)生特異性結合生成膠體金免疫復合物，離心分離。以適量金標兔抗青霉素的上層清液做晶種，加入pH3.36鹽酸-檸檬酸鈉緩沖溶液、40μg.mL-1氯金酸和21.6μg.mL-1鹽酸羥胺，利用金納米粒子表面發(fā)生的自催化反應使晶種的粒

4、徑增大，在580nm處共振散射強度增強。隨著青霉素G濃度C（0.15-225ng.mL-1）的增大，上層清液中免疫納米金微粒數(shù)量降低，I580nm值隨之降低。△I580nm與C成線性關系，其回歸方程為△I580nm=0.28C+5.16,檢出限為0.050ng.mL-1。該法用于牛奶中青霉素G的檢測，結果較好，其回收率在101.6-120.3％之間。 第四部份：免疫納米金催化Cu(II)-葡萄糖反應的共振散射光譜研究及其分析應用

5、小粒徑的金納米粒子對酒石酸鉀鈉銅絡合物-葡萄糖這一微粒反應具有較強的催化作用，其產物氧化亞銅-金復合納米微粒在608 nm處存在較強的共振散射效應。將納米金標記技術、共振散射光譜檢測技術和納米金催化作用有機地結合，可建立高靈敏、高選擇性的生化分析新方法。用粒徑為9.0nm的金納米微粒標記兔抗青霉素G抗體（RAPG）可獲得青霉素G（PG）的光譜探針（AuRAPG）。在pH5.2的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，PG與AuRAPG發(fā)生特異性結

6、合生成膠體金免疫復合物，離心分離。取適量上層清液做晶種，在0.010g.mL-1氫氧化鈉-0.86mg.mL-1硫酸銅-0.080mg.mL-1的葡萄糖-水浴70℃條件下反應，反應形成粒徑較大的氧化亞銅-金復合微粒，導致608nm處共振散射強度I608nm增強。隨著PG濃度CPG（0.090-21.6 ng.mL-1）增大，上層清液中免疫納米金微粒數(shù)量降低，I608nm值降低?！鱅608nm降低值與CPG成線性關系，其回歸方程為△I60