miR-219時空表達特征及功能研究.pdf

1、本研究利用整體原位雜交和Northem雜交技術(shù)分析了miR-219在斑馬魚、大鼠、恒河猴體內(nèi)的時空表達特征。我們發(fā)現(xiàn)miR-219在恒河猴和大鼠呈現(xiàn)腦特異性達和隨年齡梯度升高的表達模式。miR-219在斑馬魚上的主要表達在中后腦和脊髓，從16體節(jié)期開始表達到2dpf時表達最高。采用基因沉默和過表達技術(shù)觀察到斑馬魚受精卵在顯微注射miR-219和反義miR-219后均導(dǎo)致其胚胎發(fā)育缺陷，尤其是過表達miR-219后胚胎缺陷表型更為明顯，主

2、要是尾部縮短和體節(jié)異常(擬ntl基因突變表型)，并且這種表型的程度具有劑量響應(yīng)性。在此基礎(chǔ)上，我們對miR-219的可能作用機制進行了分析。首先，我們采用TUNEL技術(shù)觀察到在斑馬魚中過表達miR-219可以誘導(dǎo)胚胎細胞凋亡。其次，我們發(fā)現(xiàn)在大鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元中過表達miR-219亦出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。再次，我們采用計算生物學(xué)算法預(yù)測了miR-219的可能靶基因，篩選了在胚胎體軸形成、腫瘤發(fā)生和細胞凋亡可能有起相應(yīng)作用的靶基因，并對其中一個靶