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1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文肺癌內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體的表達(dá)及意義姓名:衡偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師:王兆鉞20070401肺癌內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體的表達(dá)及意義中文摘要關(guān),EPCR表達(dá)陽(yáng)性的癌組織中微血管密度MVD顯著高于EPCR表達(dá)陰性者但001)。(2)設(shè)計(jì)和構(gòu)建3個(gè)pshRNAEPCR重組質(zhì)粒,測(cè)序證實(shí)構(gòu)建成功;RTPCR和Westemblot顯示:與H1299親代細(xì)胞和轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒的H1299相比,轉(zhuǎn)染干擾重組質(zhì)??娠@著
2、而特異的降低H1299細(xì)胞EPCRmRNA和蛋白的表達(dá)(Po01)。(3)使用G418(500|lg/mL)篩選并經(jīng)亞克隆培養(yǎng)獲得穩(wěn)定表達(dá)EPCR沉默的肺癌細(xì)胞株H1299/shRNA,通過(guò)與陰性對(duì)照H1299/Con和未轉(zhuǎn)染的H1299細(xì)胞相比較發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期分布發(fā)生改變:H1299/shRNA在G1期細(xì)胞顯著增多,S期細(xì)胞減少,MTT和劃痕實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞增殖活性和遷移能力下降(Po01),同時(shí)細(xì)胞周期蛋白cyclinE、細(xì)胞增殖核抗原P
3、CNA及MMP2表達(dá)下調(diào)。(4)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與陰性對(duì)照H1299/Con和未轉(zhuǎn)染的H1299細(xì)胞相比,H1299/shRNA組移植瘤的潛伏期和荷瘤SCID鼠的生存期皆明顯延長(zhǎng)(Po01),移植瘤生長(zhǎng)速度顯著減緩(PO05),移植瘤內(nèi)MVD顯著下降。結(jié)論:(1)肺癌細(xì)胞和某些惡性腫瘤細(xì)胞均可表達(dá)EPCR,肺癌組織表達(dá)EPCR與轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān),提示可能參與了肺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。(2)構(gòu)建的RNA干擾質(zhì)粒能特異而有效的抑制細(xì)胞EPCR表達(dá),使
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