不同培養(yǎng)方式對人肺癌及臍靜脈內(nèi)皮細胞基因表達及差異的影響分析.pdf

1、背景與目的：血管新生(angiogenesis)是腫瘤生長和轉移的重要病理基礎和條件。實體瘤的生長取決于腫瘤細胞和腫瘤血管內(nèi)皮細胞這兩類細胞的相互作用。那么在活體內(nèi)的腫瘤內(nèi),血管內(nèi)皮細胞與腫瘤細胞相互作用是否會改變兩種細胞的基因表達、從而影響腫瘤生長及其血管生成呢?為探討兩種細胞在生長中的相互作用機制、并最大程度地模擬體內(nèi)腫瘤生長及血管生成狀態(tài),本研究在體外建立了臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC與人肺腺癌細胞株LTEP-A-2的體外細胞共培養(yǎng)體

2、系、以此環(huán)境模擬了研究體血管內(nèi)皮細胞與肺癌細胞的相互作用,并采用博奧公司22K人類全基因組寡核苷酸芯片檢測了混合培養(yǎng)狀態(tài)下兩種細胞基因表達、以Real time-PCR驗證了芯片結果的準確性。生物信息學分析其生物學作用,以圖研討兩種細胞在腫瘤血管生成過程中的互相影響,為探索抗血管生成治療機制、選擇臨床最佳治療方案提供理論參考和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞HUVEC和人肺癌細胞LTEP-A-2

3、的體外混合培養(yǎng)體系。
　　 2活細胞計數(shù)及MTT比色法研究混合培養(yǎng)及單獨培養(yǎng)狀態(tài)下的臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC和肺癌細胞LTEP-A-2的生長狀況。
　　 3利用流式細胞儀對混合培養(yǎng)細胞進行分選。
　　 4應用基因芯片技術分析兩種細胞在混合培養(yǎng)狀態(tài)下與單獨培養(yǎng)狀態(tài)下基因表達的差異,同時應用:RT-PCR方法驗證。
　　 結果：
　　 1.以基因芯片結果為基礎,在混合培養(yǎng)HUVEC細胞組共檢測到155

4、8個差異表達基因,表達上調(diào)1176個；下調(diào)382個；混合培養(yǎng)LTEP-A-2細胞組共檢測到1442個差異表達基因,表達上調(diào)762個、下調(diào)680個。
　　 2.觀察到了6個存在基因顯著表達差異的信號轉導通路:P53、MAPK、VEGF、TGF-beta、Jak-STAT、PPAR。
　　 3.通過應用實時熒光定量PCR(real-timequantitativePCR)技術對篩選出的差異表達基因進行檢測,與基因芯片結果一致