進(jìn)展期胃癌血清和組織中VEGF-C、D的表達(dá)與其侵襲和淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.pdf

1、背景和目的：實(shí)體腫瘤生長及轉(zhuǎn)移需要血管生成。當(dāng)腫瘤結(jié)節(jié)生長到1～2mm3以后，腫瘤必須有新生血管生成供給營養(yǎng)才能繼續(xù)增殖和轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞可分泌多種血管生成因子誘導(dǎo)血管生成，其中以血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth facfor)的作用最為突出，VEGF可在乳腺癌，胃癌及結(jié)腸癌等多種實(shí)體腫瘤組織中廣泛表達(dá)。 胃癌是嚴(yán)重危害人民健康的疾病，發(fā)病率占消化系統(tǒng)惡性腫瘤的首位。在我國，胃癌死亡率為25

2、.16/10萬，占惡性腫瘤死亡率的23.02％，居各類癌癥死亡的首位。臨床早期胃癌的檢出率不到10％，大部分臨床手術(shù)病例為進(jìn)展期胃癌，經(jīng)淋巴管播散其是主要轉(zhuǎn)移途徑，因此淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素之一，但胃癌淋巴轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制尚未闡明。VEGF-C及VEGF-D作為淋巴管生成因子，可與表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的VEGFR-3結(jié)合，導(dǎo)致淋巴管生成、增生、擴(kuò)張，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一條通路。目前多采用檢測組織中VEGF

3、-C，VEGF-D的表達(dá)來了解其和胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移及侵襲的關(guān)系，能否在通過檢測胃癌病人外周血及組織中VEGF-C，D的濃度來了解胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移及侵襲的關(guān)系，并為手術(shù)方式的確定和后續(xù)治療提供依據(jù)成為人們研究的熱點(diǎn)。本研究旨在探討血清及組織中VEGF-C，D水平，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其和進(jìn)展期胃癌淋巴道轉(zhuǎn)移與侵襲的關(guān)聯(lián)。 方法：實(shí)驗(yàn)共分三組，進(jìn)展期胃癌病例88例，分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性(N=50)及陰性組(N=38)，早期胃癌組(N=10)

4、，正常對照組(N=10)。 第一階段：確定設(shè)計(jì)方案、研究對象和標(biāo)本收集。 第二階段：ELISA法檢測三組血清中VEGF-C、D表達(dá)水平。研究對象：主要是定出研究對象的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)。研究對象的納入標(biāo)準(zhǔn)：為未作放、化療的進(jìn)展期胃癌和早期胃癌手術(shù)患者(進(jìn)展期胃癌和早期胃癌的診斷通過術(shù)后病理結(jié)合術(shù)前胃鏡檢查證實(shí))，有手術(shù)指征、無手術(shù)禁忌癥。對照組為胃潰瘍病人。研究對象的排除標(biāo)準(zhǔn)：非手術(shù)的胃癌患者，術(shù)前經(jīng)過放、化療的進(jìn)展胃癌患者

5、。有近期手術(shù)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷及肝腎功能異常為排除對象。應(yīng)用人VEGF-C、D ELISA檢測試劑盒檢測血清VEGF-C、D的水平，抽取外周靜脈血5 mL，分離血清，避免溶血，-70℃保存?zhèn)溆茫瑖?yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。 第三階段：采用EnVison TM兩步法檢測上述三組病例組織中的VEGF-C、D表達(dá)(胃癌組組織取自腫瘤中央，對照組組織取自潰瘍周圍正常胃粘膜)。標(biāo)本收集：臨床手術(shù)中切取標(biāo)本1×1×2cm，然后石蠟包埋、切片

6、，制成4 μm厚切片備用。DAKO EnVision顯色系統(tǒng)檢測上述三組病例組織中的VEGF-C、D表達(dá)，同時(shí)對伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組進(jìn)行兩組VEGF-C、D蛋白表達(dá)率的比較，了解其對進(jìn)展期胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果： 1.進(jìn)展期胃癌患者血清VEGF-C和VEGF-D水平明顯高于對照組(P＜0.05)，與早期胃癌組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。 2.進(jìn)展期胃癌患者血清VEGF-C高水平表達(dá)與淋

7、巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，進(jìn)展期血清VEGF-D高水平表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。 3.在進(jìn)展期胃癌組織中，VEGF-C、D呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率分別為：52.5％，62.5％。與早期胃癌組及對照組比較，進(jìn)展期胃癌中VEGF-C、D陽性表達(dá)率更高(P＜0.05)。 4.在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃癌中，VEGF-C陽性表達(dá)率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者更高，差異有顯著性(P＜0.05)；VEGF-D陽性表達(dá)率在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移