HBsAg負(fù)載的慢性乙肝患者DCs誘導(dǎo)特異性Th1細(xì)胞分化的作用.pdf

1、目的：研究I-msAg負(fù)載的慢性乙肝患者外周血單核細(xì)胞來源的DCs(Dendriticcells，DCs)對(duì)自身Thl細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用。 方法：采用Ficoll密度梯度離心和貼壁法分離慢性乙肝患者外周血單核細(xì)胞，以rhlL-4(50ng/m1)+rhGM-CSF(100ng/m1)的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)DCs，實(shí)驗(yàn)共分四組：對(duì)照組(IL-4+GM-CSF培養(yǎng)體系)、IFN.γ組(IL-4+GM-CSF+IFN.Y培養(yǎng)體系)、HBsA

2、g組(IL-4+GM-CSF+HBsAg)和IFN.Y+HBsAg組(IL-4+GM-CSF+IFN-Y+HBsAg)。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組DCs表面CD80、CD86、CD40、HLA-DR分子的表達(dá)情況，CCK-8法檢測(cè)DCs刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力，ELISA法測(cè)定DCs培養(yǎng)液上清中IL.12的水平。免疫磁珠分選慢性乙肝患者外周血CD4+T細(xì)胞，將在不同的培養(yǎng)體系下誘導(dǎo)成熟的DCs分別與患者自身的CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)。細(xì)胞內(nèi)

3、細(xì)胞因子染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)共培養(yǎng)后CD4+T細(xì)胞內(nèi)特征性細(xì)胞因子IFN-Y/IL-4；同時(shí)用ELISA法檢測(cè)共培養(yǎng)上清中IFN-Y和IL-4的水平。 結(jié)果：與對(duì)照組相比，HBsAg組、IFN-γ組和HBsAg+IFN-Y組培養(yǎng)第八天的DCs表面表達(dá)CD80、CD86、CD40和HLA-DR分子水平較高；刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力較強(qiáng)；DCs分泌的上清液中，IL.12水平也較高。與對(duì)照組相比，HBsAg組、IFN-γ組和HB

4、sAg+IFN-Y組DCs與自身Th細(xì)胞共培養(yǎng)后，Till細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比較高，Th2細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比較低，共培養(yǎng)上清中，IFN.Y的水平較高，IL-4的水平較低。而且，這些都以HBsAg+IFN-γ組最為明顯。 結(jié)論：慢性乙肝患者單核細(xì)胞來源的DCs經(jīng)HBsAg負(fù)載后，功能明顯改善，能夠有效促進(jìn)特異性Thl細(xì)胞分化，與IFN-γ聯(lián)合誘導(dǎo)則作用更顯著。提示，經(jīng)HBsAg負(fù)載的DCs可以改善患者體內(nèi)因DCs