負載K-ras抗原的樹突狀細胞誘導(dǎo)特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)對肺癌細胞的殺傷作用.pdf

1、目的：
　　肺癌是當今世界上最常見的惡性腫瘤之一，也是當前我國腫瘤死亡的主要原因之一。由于早期肺癌患者往往缺乏明顯的臨床癥狀，導(dǎo)致75％的患者就診時已失去根治性手術(shù)的機會，而姑息性手術(shù)或常規(guī)放化療僅能夠部分改善癥狀，無法獲得良好的緩解率，從而使得肺癌患者的中位生存期僅能達到12～18個月。除此之外，生物治療也已經(jīng)在臨床治療肺癌方面得到了廣泛的應(yīng)用，主要包括基因治療及免疫治療。而免疫治療主要包括有細胞因子治療、特異性主動免疫治療和過

2、繼性細胞免疫治療等。在人體內(nèi)存在許多種抗原提呈細胞（Antigen presenting cell，APC，其中功能最為強大的是樹突狀細胞（Dendritic cells，DC），因此人們也越來越注意到樹突狀細胞在肺癌治療中的作用。近年來，大量研究表明K-ras基因突變是非小細胞肺癌發(fā)展過程中的一個重要的負性預(yù)后因素，而K-ras基因已成為肺癌生物治療的一個重要靶位。本研究擬通過在體和體外實驗，探討負載不同抗原的DC誘導(dǎo)的腫瘤特異性CT

3、L對肺癌細胞的殺傷效應(yīng)及其對荷瘤裸鼠的抑制作用。
　　方法：
　　聯(lián)合應(yīng)用粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和白細胞介素4（IL-4）誘導(dǎo)外周血樹突狀細胞（DC），分別使用表達K-ras突變體的肺癌細胞抗原、單純K-ras突變體抗原表位肽和K-ras突變體抗原表位肽陽離子納米顆粒致敏DC，進而通過誘導(dǎo)刺激T淋巴細胞得到特異性的CTL。流式細胞儀測定DC細胞表面標志，MTT法檢測CTL細胞在體外對腫瘤細胞的殺傷作

4、用，ELISA試劑盒檢測IL-12和IFN-γ表達水平。分別使用肺癌A549、NCH-446細胞系建立荷瘤裸鼠模型評價CTL體內(nèi)抗腫瘤活性。
　　結(jié)果：
　　在體外實驗中，與單純K-ras突變體多肽相比，K-ras突變體表位肽陽離子納米顆粒在低濃度時即可被DC有效提呈（P<0.05）；與負載單純K-ras突變體多肽和K-ras突變體表位肽陽離子納米顆粒組相比，負載全瘤抗原組DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CTL對A549（K-ras+）和NC

5、H-446（K-ras-）均有明顯殺傷活性（P<0.05）；而負載單純K-ras突變體多肽、K-ras突變體表位肽陽離子納米顆粒的DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CTL對A549（K-ras+）有特異性殺傷作用，而對NCH-446（K-ras-）細胞無殺傷作用（P>0.05）。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，負載全瘤抗原的DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CTL對表達K-ras陽性（A549）的肺癌細胞具有較好的抑制作用，而對K-ras表達陰性（NCH-446）的肺癌細胞抑制作用與對照組