大白菜春化相關(guān)基因Bra028171功能鑒定.pdf

1、春化是大白菜[Brassica campestris L.ssp.pekinensis(Lour)Olsson]開花途徑中一個重要的階段，大白菜需要一定的低溫誘導(dǎo)才能從營養(yǎng)生長轉(zhuǎn)變?yōu)樯成L，進(jìn)而抽臺開花。在春化過程中有一系列基因發(fā)揮著作用，共同調(diào)節(jié)植物的開花進(jìn)程。本試驗所研究的未知基因Bra028171是本實驗室前期的一個研究中，經(jīng)過春化處理后發(fā)生甲基化變化的一個基因，Bra028171位于大白菜第4號染色體上。Bra028171的長

2、度為786bp，是一段保守序列，該基因在擬南芥中有同源基因At5g38320，該基因功能同樣未知。本試驗通過克隆該基因，研究其亞細(xì)胞定位，探究此基因的表達(dá)模式以及構(gòu)建了超表達(dá)和RNAi載體并轉(zhuǎn)化到模式植物擬南芥中來初步分析此基因的功能，進(jìn)而摸索探究該基因在大白菜春化過程中所發(fā)揮的作用。為大白菜抽薹開花的進(jìn)程提供參考，同時為預(yù)防大白菜未熟抽薹的現(xiàn)象提供理論依據(jù)。
　　試驗結(jié)果歸納如下:
　　(1)通過對Bra028171的序列

3、分析，我們發(fā)現(xiàn)該基因在擬南芥中有一個同源基因At5g38320，該基因同樣是未知基因。通過對Bra028171的生物信息學(xué)分析，我們得到了一些結(jié)果:Bra028171全長786bp，形成的蛋白質(zhì)長度為261，該基因所預(yù)測的等電點為5.55，并用在線工具預(yù)測了該基因所編碼蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)
　　(2)通過對Bra028171的熒光定量PCR分析，我們知道了該基因在莖部的表達(dá)量最高，尤其是在開花期，莖部的表達(dá)量明顯大于其他的部位，可知該

4、基因主要在莖部表達(dá)
　　(3)通過對Bra028171的亞細(xì)胞定位分析，發(fā)現(xiàn)Bra028171定位于細(xì)胞核
　　(4)成功構(gòu)建了Bra028171的超表達(dá)載體和RNAi干擾載體，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)將重組的質(zhì)粒導(dǎo)入到了擬南芥中
　　(5)對有抗性的擬南芥進(jìn)行特異性引物的PCR鑒定，經(jīng)鑒定，22株超表達(dá)載體中有12株是陽性株，16株RNAi載體中，有9株是陽性株，陽性率分別為55％h和56％。
　　(6)對轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)