甜菜抗叢根病種質(zhì)資源的鑒定與評(píng)價(jià).pdf

1、甜菜叢根病是甜菜生產(chǎn)區(qū)的一種毀滅性病害，選育甜菜抗叢根病品種是目前解決該病最有效的方法，而新品種選育又是以優(yōu)良性狀的種質(zhì)資源為基礎(chǔ)，因此對(duì)抗叢根病種質(zhì)資源的鑒定與評(píng)價(jià)十分重要。本論文以甜菜抗叢根病種質(zhì)資源為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化和分子標(biāo)記的綜合鑒定與評(píng)價(jià)，目的在于對(duì)已收集的抗叢根病育種材料進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，挖掘有利基因種質(zhì)材料，從而達(dá)到種質(zhì)資源的有效利用，探索甜菜種質(zhì)資源鑒定的有效方法和技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下: 1.3

2、1份供試材料在14個(gè)形態(tài)指標(biāo)上表現(xiàn)出較大的差異。在相關(guān)分析中找出了各項(xiàng)性狀之間的相關(guān)性。在主成分分析中，第一主成分代表了全部信息的34％，而其中株高、塊根產(chǎn)量、產(chǎn)糖量和病情指數(shù)所占的分量較大。將譜帶進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，供試材料被劃分為五大類群。 2.采用EST同工酶和POD同工酶對(duì)甜菜抗叢根病種質(zhì)資源材料進(jìn)行鑒定，兩種同工酶在電泳酶帶數(shù)量上較少，標(biāo)記位點(diǎn)較少。 3.利用優(yōu)化后的凝膠電泳條件對(duì)甜菜種子鹽溶蛋白進(jìn)行SDS-PA

3、GE電泳，該蛋白具有豐富的譜帶，種質(zhì)間在譜帶數(shù)目、相對(duì)遷移率和帶的強(qiáng)弱等方面均可見較明顯的差異。將譜帶進(jìn)行0-1聚類分析，供試材料被劃分為五大類群。 4.優(yōu)化甜菜ISSR-PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序，反應(yīng)體系為:在20μL的反應(yīng)體積中包括10×PCR Buffer 2pμL 、2.5mmol/L. MgCI2、dNTPs0.25mmol/L、1.5 U Taq DNA聚合酶、引物0.5Pm01/L、100ngDNA模板。PCR擴(kuò)增

4、程序?yàn)?94℃預(yù)變性3min，然后94℃變性30s，45℃(不同引物退火溫度不同)退火30s，72℃延伸1 min，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)后，最后72℃延伸5min。 5.利用優(yōu)化后的ISSR-PCR擴(kuò)增體系、擴(kuò)增程序及篩選出的2個(gè)引物對(duì)供試材料進(jìn)行DNA擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果中共檢測(cè)出13條譜帶，材料間擴(kuò)增的總帶數(shù)和差異帶帶數(shù)變化較大。經(jīng)0-1聚類分析，供試材料被劃分為六大類群。 6.利用4種鑒定技術(shù)對(duì)甜菜抗叢根病種質(zhì)資源進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)