PeroxiredoxinⅠ和Ⅱ在輸卵管和子宮的分布與表達(dá)及PeroxiredoxinⅡ?qū)π∈笾踩肭芭甙l(fā)育的作用.pdf

1、目的： 觀察抗氧化酶Peroxiredoxin I和Ⅱ(Prx I和Ⅱ)在昆明小鼠輸卵管和子宮的分布及其周期性變化。觀察PrxⅡ?qū)ッ餍∈笾踩肭芭甙l(fā)育和克服2-細(xì)胞阻滯的作用。 方法： 1.免疫組織化學(xué)方法觀察Prx I和Ⅱ在昆明小鼠輸卵管和子宮的分布。 2.蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)Prx I和Ⅱ在小鼠動(dòng)情期和動(dòng)情間期的表達(dá)變化。 3.收集昆明小鼠1.細(xì)胞胚，采用微滴培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)，觀察在M16培養(yǎng)液

2、中添加PrxⅡ蛋白對(duì)植入前胚發(fā)育的影響，觀察其是否能克服2-細(xì)胞阻滯。 4.收集昆明小鼠(阻滯品系小鼠)和B6C3F1小鼠(非阻滯品系小鼠)1-細(xì)胞胚，采用微滴培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)，觀察在M16培養(yǎng)液(37℃、5％CO2和飽和濕度培養(yǎng)條件下)各自的發(fā)育情況。 5.應(yīng)用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)結(jié)合特異性熒光探針2’，7’二氯熒光黃雙乙酸酯，檢測(cè)昆明小鼠體外培養(yǎng)與體內(nèi)發(fā)育2.細(xì)胞胚以及昆明小鼠與B6C3F1小鼠體外培養(yǎng)2-細(xì)胞胚內(nèi)

3、活性氧自由基(ROS)水平差異。 結(jié)果： 1.在輸卵管中，Prx I和Ⅱ免疫陽(yáng)性反應(yīng)見于輸卵管上皮；而子宮內(nèi)，PrxI免疫陽(yáng)性反應(yīng)分布于內(nèi)膜上皮、腺體上皮和內(nèi)膜基質(zhì)內(nèi)細(xì)胞，而PrxⅡ主要見于內(nèi)膜基質(zhì)內(nèi)細(xì)胞。 2.蛋白免疫印跡技術(shù)也顯示這兩型蛋自在輸卵管和子宮均表達(dá)，動(dòng)情期和動(dòng)情間期這兩型蛋白在輸卵管和子宮中的表達(dá)水平無(wú)顯著性差異。 3.昆明小鼠1-細(xì)胞胚在添加PrxⅡ蛋白的MI 6培養(yǎng)液中培養(yǎng)，其4-細(xì)胞

4、胚發(fā)育率與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。 4.昆明小鼠1-細(xì)胞胚在M16中培養(yǎng)多數(shù)停滯于2-細(xì)胞期，基本無(wú)法發(fā)育至囊胚；而B6C3F1小鼠1-細(xì)胞胚發(fā)育良好，絕大多數(shù)可越過(guò)2-細(xì)胞期且大多數(shù)可發(fā)育至囊胚，兩者的4-細(xì)胞胚和囊胚發(fā)育率均有顯著性差異。 5.昆明小鼠體外培養(yǎng)2-細(xì)胞胚內(nèi)ROS水平顯著低于體內(nèi)發(fā)育2.細(xì)胞胚，差別有顯著性意義；亦低于B6C3F1小鼠體外培養(yǎng)2-細(xì)胞胚內(nèi)ROS水平，但差別無(wú)顯著性意義。 結(jié)論：