脾胃濕熱證與幽門螺桿菌感染及熱休克蛋白70表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、證候研究：是中醫(yī)理論研究的突破口之一。脾胃濕熱證是脾胃實(shí)證中的一個常見證型，在消化系統(tǒng)疾病中占有重要的地位，對它的深入研究，有助于脾本質(zhì)研究的深入開展。胃粘膜幽門螺桿菌感染(H.pylori，Hp)是一種可持續(xù)數(shù)十年的慢性過程，其持續(xù)的感染可引起慢性炎癥和免疫反應(yīng)。而熱休克蛋白70(HSP70)在減輕胃粘膜炎癥和維持粘膜完整中有重要作用。本研究擬以慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證患者為中心，通過病理組織學(xué)、免疫組織化學(xué)染色以及熒光定量PCR等方

2、法，檢測胃粘膜炎癥程度、Hp感染情況、HSP70的蛋白和基因表達(dá)情況，并探討它們與脾胃濕熱證的關(guān)系，以及HSP70對慢性淺表性胃炎的影響，必將有助于拓寬對脾胃濕熱證的研究思路，推動中醫(yī)脾胃學(xué)說理論的發(fā)展，更為Hp相關(guān)性胃炎的防治提供理論指導(dǎo)。 一、文獻(xiàn)研究通過對古代文獻(xiàn)的整理分析，認(rèn)為歷代關(guān)于脾胃濕熱證的研究大致經(jīng)歷了萌芽、奠基、形成與發(fā)展四個階段，并形成一個理、法、方、藥較為完善的理論體系。認(rèn)為脾胃濕熱證的病因病機(jī)主要為內(nèi)因或

3、外因?qū)е缕⑹Ы∵\(yùn)，水濕內(nèi)停，濕聚化熱，濕熱內(nèi)生。清熱祛濕結(jié)合調(diào)理脾胃是脾胃濕熱證總的治療法則。 現(xiàn)代醫(yī)家從病證結(jié)合入手進(jìn)一步完善了脾胃濕熱證理論，并進(jìn)行了一系列的研究：包括診斷標(biāo)準(zhǔn)的制定、流行病學(xué)調(diào)查，以及對脾胃濕熱證本質(zhì)的探討等。但總體看來，研究比較分散，重復(fù)性的研究較多，不同方面間的聯(lián)系較少，應(yīng)進(jìn)一步深入探索。 關(guān)于熱休克蛋白(HSPs)，介紹了它的發(fā)現(xiàn)、分類和特性，詳細(xì)介紹了熱休克蛋白70(HSP70)的功能。HS

4、P70作為一種在進(jìn)化過程中有高度保守性的應(yīng)激蛋白，在防止熱和其它應(yīng)激引起的細(xì)胞損害及保護(hù)胃粘膜方面起著重要的作用，為我們研究脾胃濕熱證提供了新的思路。 二、臨床實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)一慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證與Hp感染的關(guān)系研究對象：選擇中醫(yī)辨證屬于脾胃濕熱證和脾虛證的慢性淺表性胃炎患者38例，其中脾胃濕熱證22例(濕重于熱者4例，濕熱并重者12例，熱重于濕者6例)，脾虛證16例，正常健康體檢者10例。 研究方法：各組受試對象均于

5、胃鏡下取胃竇粘膜，內(nèi)窺鏡下和常規(guī)HE染色法觀察胃粘膜的炎癥程度，采用甲苯胺藍(lán)染色法和快速尿素酶試驗(yàn)檢測Hp。 研究結(jié)果：Hp檢出率：脾胃濕熱證組為68.18％；脾虛證組為43.75％；正常組為10.0％。脾胃濕熱證組與脾虛證組、脾虛證組與正常對照組之間均無顯著性差異(P＞0.05)，而脾胃濕熱證組與正常對照組卻有顯著性差異(P＜0.01)。 脾胃濕熱證組主要臨床癥狀積分比較：Hp陽性組惡心、便溏、肢體困重、納呆積分低于H

6、p陰性組；胃脘痞滿或脹或痛、口干口苦、舌苔黃膩積分高于Hp陰性組。其中舌苔黃膩積分明顯高于Hp陰性組，具有顯著性差異(P＜0.01)。 脾胃濕熱證組與脾虛證組在炎癥程度方面均明顯重于正常對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著性差異(P＜0.01)；脾胃濕熱證組炎癥程度重于脾虛證組，但無顯著性差異(P＞0.05)。脾胃濕熱證組各亞型之間也無顯著性差異(P＞0.05)。Hp陽性組炎癥程度重于Hp陰性組，但無顯著性差異(P＞0.05)。

7、 實(shí)驗(yàn)二慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證、Hp感染與HSP70蛋白表達(dá)的關(guān)系研究對象：同實(shí)驗(yàn)一。 研究方法：取材方法同實(shí)驗(yàn)一。采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測胃竇粘膜HSP70的蛋白表達(dá)。 研究結(jié)果：HSP70主要表達(dá)于胃竇粘膜上皮和固有層腺體細(xì)胞，部位以胞漿為主。正常組HSP70示弱表達(dá)。 慢性淺表性胃炎患者HSP70主要表達(dá)于胃竇粘膜上皮和固有層腺體細(xì)胞，而且在固有層炎癥細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及單核細(xì)胞)有強(qiáng)表達(dá)，

8、定位在胞漿。 以染色指數(shù)作為觀察指標(biāo)，比較不同組間HSP70的蛋白表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：HSP70在脾胃濕熱證組和脾虛證組的表達(dá)水平明顯高于正常對照組，且均具有顯著性差異(P＜0.01)。脾胃濕熱證組HSP70表達(dá)水平高于脾虛證組；脾胃濕熱證組各亞型之間相比較，HSP70蛋白表達(dá)水平呈熱重于濕＞濕熱并重＞濕重于熱的趨勢，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均無顯著性差異(P＞0.05)。脾胃濕熱證組中，Hp陽性者HSP70蛋白表達(dá)水平高于Hp陰性者；

9、脾虛證組中，Hp陽性者HSP70蛋白表達(dá)水平略低于Hp陰性者，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二者均無顯著性差異(P＞0.05)。 實(shí)驗(yàn)三慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證、Hp感染與HSP70基因表達(dá)的關(guān)系研究對象：同實(shí)驗(yàn)一。 研究方法：各組受試對象均在胃鏡下取胃竇粘膜組織，并迅速放入液氮罐保存?zhèn)錈晒舛縋CR檢測HSP70的基因表達(dá)。 研究結(jié)果：脾胃濕熱證組和脾虛證組HSP70基因表達(dá)水平均高于正常對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，具有顯著性差異

10、(P＜0.01)。脾胃濕熱證組HSP70基因表達(dá)水平高于脾虛證組，但無顯著性差異(P＞0.05)。脾胃濕熱證組各亞型中，HSP70基因的表達(dá)水平呈熱重于濕＞濕熱并重＞濕重于熱的趨勢，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，無顯著性差異(P＞0.05)。脾胃濕熱證組中，Hp陽性者HSP70基因表達(dá)水平高于Hp陰性者；脾虛證組中，Hp陽性者HSP70基因表達(dá)水平略低于Hp陰性者，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二者均無顯著性差異(P＞0.05)。 三、結(jié)論和建議(一)結(jié)論

11、本研究在系統(tǒng)整理脾胃濕熱證古代文獻(xiàn)和總結(jié)現(xiàn)代關(guān)于脾胃濕熱證研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，通過病理組織學(xué)、免疫組化以及熒光定量PCR等方法的檢測，初步探討了慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證與Hp感染及HSP70表達(dá)的關(guān)系，得出以下結(jié)論： 1、歷代關(guān)于脾胃濕熱證的研究大致經(jīng)歷了萌芽、奠基、形成與發(fā)展四個階段，并形成一個理、法、方、藥較為完善的理論體系。 2、慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證型Hp感染率高于脾虛證型。Hp感染與舌苔黃膩有一定的聯(lián)系。

12、 3、慢性淺表性胃炎脾胃濕熱證型的炎癥程度重于脾虛證型。胃鏡下可見胃粘膜充血水腫明顯，多伴糜爛或出血點(diǎn)，胃粘液糊量偏多；病理組織學(xué)檢查見固有層有炎癥細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和單核細(xì)胞為主，部分病例伴有上皮破壞。 4、慢性淺表性胃炎Hp陽性組炎癥程度重于Hp陰性組。病理組織學(xué)檢查，Hp陽性組除固有層炎癥細(xì)胞浸潤、上皮破壞外，還見到淋巴濾泡的形成。 5、HSP70在正常健康人胃粘膜有弱表達(dá)。慢性淺表性胃炎中，HSP70

13、主要表達(dá)于胃竇粘膜上皮和固有層腺體細(xì)胞，在固有層炎癥細(xì)胞有強(qiáng)表達(dá)，其定位主要在胞漿中。 6、HSP70基因和蛋白表達(dá)水平：脾胃濕熱證組＞脾虛證組＞正常對照組；脾胃濕熱證組各亞型中，HSP70基因和蛋白表達(dá)水平呈熱重于濕＞濕熱并重＞濕重于熱的趨勢。本實(shí)驗(yàn)說明，“熱”與“濕”在脾胃濕熱證中的比分可能會影響HSP70在脾胃濕熱證型中的表達(dá)，即“熱邪”提高了HSP70的表達(dá)；而“濕邪”降低了HSP70的表達(dá)。 7、脾胃濕熱證組H

14、p陽性者HSP70蛋白和基因表達(dá)水平高于Hp陰性者；脾虛證組Hp陽性者HSP70蛋白和基因表達(dá)水平接近于Hp陰性者。究其原因可能是脾胃濕熱證型中，正氣奮起抗邪，HSP70表達(dá)隨應(yīng)激(Hp感染)增強(qiáng)，因而Hp陽性者HSP70高于Hp陰性者；而脾虛證型由于正氣虛弱，機(jī)體抗應(yīng)激減弱，因而Hp陽性者HSP70表達(dá)與Hp陰性者相近。本研究提示：Hp感染會使HSP70表達(dá)增強(qiáng)，但人體正氣的強(qiáng)弱卻會影響HSP70的表達(dá)。 (二)建議1、要運(yùn)用

15、各種方法，通過各種途徑，加強(qiáng)各學(xué)科之間的協(xié)作，繼續(xù)更深入探討脾胃濕熱證的本質(zhì)。 2、為了更好地弄清脾胃濕熱證的本質(zhì)，不應(yīng)僅將研究局限于慢性胃炎，而應(yīng)對脾胃濕熱證相關(guān)性疾病也要加強(qiáng)研究，以尋找共同規(guī)律，揭示其本質(zhì)。 3、今后應(yīng)增加研究例數(shù)，通過大樣本，長時間的研究觀察，探清Hp和HSP70相互之間的關(guān)系，對于揭示脾胃濕熱證本質(zhì)有重大意義，并必將推動中醫(yī)脾胃理論的發(fā)展。對于今后通過發(fā)掘能夠提高HSP70表達(dá)的中草藥而研制防治