利用AFLP分子標(biāo)記分析山杏的遺傳多樣性.pdf

1、山杏(Armeniaca sibirica(L.)Lam.)，薔薇科，李亞科，杏屬，通常為落葉灌木或喬木，耐寒、耐旱、耐瘠薄等，杏仁營(yíng)養(yǎng)豐富，具有很高的經(jīng)濟(jì)、藥用價(jià)值，葉、花、樹皮、樹根也均可入藥。主要分布于河北、遼寧及內(nèi)蒙古等地，作為防風(fēng)固沙的優(yōu)勢(shì)樹種。過去對(duì)山杏的研究主要集中在栽培、嫁接技術(shù)等方面，而選育種、資源分類等方面的研究較少，本試驗(yàn)在張家口市赤城縣及承德市豐寧滿族自治區(qū)進(jìn)行豐產(chǎn)、晚花及其他特異類型初選的基礎(chǔ)上，結(jié)合表型性狀，

2、利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)初選種質(zhì)進(jìn)行了分類和遺傳關(guān)系分析，為山杏種內(nèi)分類、種質(zhì)特性和遺傳改良等研究提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下: 1.確定了適于AFLP分析的山杏基因組DNA的提取方法(改良CTAB法)，其提取液成分為:基本提取液(100mmol/L Tris-HCl，20mmol/LEDTA, 1.4mol/L MNaCl，2％CTAB)中添加1％PVP-40、1％Vc、10mmol/LNa2S2O5和2％β-巰基乙醇等防酚抗

3、氧化物質(zhì)。粗提后的DNA經(jīng)RNase酶除去RNA，苯酚/氯仿抽提一次，氯仿/異戊醇抽提一次，無水乙醇沉淀，得到了RNA去除徹底、純度高、質(zhì)量好的山杏基因組DNA。 2.建立了適于山杏分析的AFLP銀染技術(shù)體系:采用由稀有堿基切點(diǎn)酶MseI和常見堿基切點(diǎn)酶EcoRI同時(shí)進(jìn)行酶切，MseI和EeoRl的用量各為3U，酶切時(shí)間以37℃下酶切4小時(shí)為最佳；加入接頭后，37℃連接10h以上(或過夜)；連接產(chǎn)物稀釋10倍后進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增；預(yù)擴(kuò)增

4、產(chǎn)物稀釋10倍后再進(jìn)行選擇性擴(kuò)增；加10μL Loading buffer，95℃變性10min，立即冰??；在6％變性聚丙烯酞胺凝膠上進(jìn)行電泳分析；銀染法檢測(cè)PCR產(chǎn)物。 3.從64對(duì)引物組合中篩選出10對(duì)多態(tài)性高、條帶清晰、分布均勻的引物組合用于材料分析，共擴(kuò)增出可統(tǒng)計(jì)條帶470條，平均每對(duì)引物擴(kuò)增帶數(shù)為47條。其中多態(tài)性條帶274條，占總帶數(shù)的58.3％。 4.應(yīng)用NTSYSpc2.1O軟件計(jì)算相似系數(shù)介于0.68～