重組腺病毒介導(dǎo)P53基因治療子宮內(nèi)膜癌的體外研究.pdf

1、目的：檢測攜帶野生型P53基因的重組腺病毒顆粒(rAd-p53)體外轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2后外源性P53的表達(dá)，觀察rAd-p53對(duì)RL95-2細(xì)胞生長狀態(tài)及化療敏感性的影響，探討rAd-p53治療子宮內(nèi)膜癌臨床應(yīng)用的可行性。 方法：利用攜帶野生型P53的重組腺病毒體外轉(zhuǎn)染P53基因突變的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2，GFP報(bào)告基因檢測轉(zhuǎn)染效率。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測外源性P53基因在RL95-2細(xì)胞中的表達(dá)；通過MTT實(shí)

2、驗(yàn)觀察rAd-p53對(duì)RL95-2細(xì)胞增殖的抑制作用，應(yīng)用倒置顯微鏡觀察rAd-p53對(duì)RL95-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響；以Annexin-FITC/PI凋亡檢測試劑盒檢測RL95-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染rAd-p53前后凋亡細(xì)胞比率的變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測rAd-p53對(duì)RL95-2細(xì)胞周期分布及凋亡的影響；通過MTT測定細(xì)胞存活率和細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染rAd-p53前后RL95-2細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素敏感性的影響。 結(jié)果：1．外源性P5

3、3基因經(jīng)腺病毒載體成功轉(zhuǎn)入RL95-2細(xì)胞，當(dāng)感染復(fù)數(shù)MOI=100時(shí)，體外轉(zhuǎn)染效率達(dá)到90﹪以上。2．細(xì)胞免疫組化法檢出外源性p53的高表達(dá)，與Ad-GFP組和空白對(duì)照組相比，rAd-p53組細(xì)胞中P53的表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3．rAd-P53能顯著抑制RL95-2細(xì)胞生長，生長曲線顯示rAd-P53組細(xì)胞的增殖速度遠(yuǎn)慢于Ad-GFP組和空白對(duì)照組；不同時(shí)段rAd-P53組細(xì)胞增殖抑制率與Ad-GFP組相比

4、均明顯升高(P<0.01)；轉(zhuǎn)染72h后，rAd-p53組細(xì)胞增殖抑制率呈劑量依賴性；轉(zhuǎn)染rAd-P53的RL95-2細(xì)胞出現(xiàn)了典型的病理變化，形態(tài)學(xué)改變具有時(shí)間依賴性。4．rAd-P53還可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌RL95-2細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期G1期阻滯，與Ad-GFP組和空白對(duì)照組比較有顯著差異性(P<0.01)。5．經(jīng)rAd-p53轉(zhuǎn)染的子宮內(nèi)膜癌RL95-2細(xì)胞對(duì)順鉑和阿霉素的敏感性增強(qiáng)， IC<,50>分別降低為轉(zhuǎn)染前的1/10和1/1

5、8，且細(xì)胞的集落形成百分率明顯少于Ad-GFP組和空白對(duì)照組，具有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論：1．重組腺病毒rAd-P53是高效的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)，能將野生型P53基因?qū)雴适г摶蚬δ艿淖訉m內(nèi)膜癌RL95-2細(xì)胞中。 2．rAd-P53對(duì)RL95-2細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)有力的生長抑制及凋亡誘導(dǎo)作用，并且能有效阻滯細(xì)胞周期于G<,1>期。3．rAd-P53可增強(qiáng)RL95-2細(xì)胞對(duì)順鉑、阿霉素的敏感性，rAd-P53基因治療可望成為晚期、