重組人P53腺病毒基因經(jīng)介入治療肝癌實驗研究.pdf

1、第一部分: 目的：探討兔VX2移植性肝癌模型的建立及重組人P53腺病毒基因（rAd-p53，1X1012VP/支）經(jīng)介入途徑在兔VX2移植性肝癌模型中的表達特點。 材料與方法：將60只新西蘭大白兔采用移植法建立兔VX2移植性肝癌模型，于移植術11天行磁共振（MRI）、CT檢查，計算其體積（V1）。隨機抽取27只移植成功的荷瘤兔，平均分成三組：A組：經(jīng)肝動脈單純灌注rAd-p53（5X106 VP）；B組：rAd-p53（

2、5X106 VP）+超液態(tài)碘油0.5ml/只經(jīng)肝動脈灌注；C組：瘤內(nèi)rAd-p53（5X106 VP）直接導入。所有荷瘤兔術中均行DSA攝影。介入術后24h、72h、6天分別處死實驗兔，通過免疫組織化學方法檢測腫瘤組織及瘤周P53和Bax、Bcl-2蛋白的表達。 結果：所有60只大白兔經(jīng)MRI及CT檢查證實有57只種瘤成功，成功率95％。兔VX2移植性肝癌模型CT平掃呈低密度或等密度影；MRI掃描TW1表現(xiàn)為低信號，TW2表現(xiàn)為

3、高信號，信號均勻，邊界清楚；DSA顯示瘤灶血供主要來自于肝動脈，為富血管性，可見腫瘤染色。檢測到A組P53蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為19.65±5.29，62.43±3.27，18.73±3.45；B組P53蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為20.28±4.34，65.43±2.13，19.63±4.23；C組P53蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為26.53±6.07，70.36±3.43，26.36±

4、4.35。A組Bax蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為8.56±1.27，35.75±1.35，9.84±2.46；B組Bax蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為11.32±2.13，37.63±2.46，10.34±2.13；C組Bax蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為17.64±2.25，43.76±2.19，16.89±1.67。A組Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為30.43±3.06，1

5、8.03±4.36，29.65±4.32；B組Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為28.36±2.25，16.21±3.17，27.70±3.39；C組Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表達率分別為24.27±4.37，12.07±2.64，23.84±2.51。P53和Bax蛋白的表達呈與時間相關性正態(tài)分布，以C組表達最高，Bcl-2蛋白表達隨P53蛋白表達的增多而減少。 結論：兔VX2移植性肝癌模型影像

6、學特點與人肝癌相似，可用于肝癌的實驗研究；P53蛋白在兔VX2肝癌模型中的表達呈正態(tài)分布，Bax、Bcl-2蛋白的表達與P53蛋白表達相關；不同的rAd-p53介入導入方式P53、Bax、Bcl-2蛋白表達不同，以瘤內(nèi)及瘤周直接注射方式表達最高，與超液態(tài)碘油混合灌注及單純肝動脈灌注次之。 第二部分: 目的：觀察重組人P53腺病毒基因經(jīng)不同介入導入方式對兔VX2移植性肝癌模型治療效果。 材料與方法：采用第一部分成功

7、建立的30只兔VX2移植性肝癌模型，介入術14天分別行CT、MRI檢查，計算其體積（V2），對其生長率進行比較，所有荷瘤兔術中均行DSA攝影。隨機分成五組，A組：經(jīng)肝動脈灌注生理鹽水0.5ml；B組：經(jīng)肝動脈灌注超液態(tài)碘油0.5ml/只行栓塞治療；C組：經(jīng)肝動脈單純灌注rAd-p53（5X106 VP）；D組：rAd-p53（5X106 VP）+超液態(tài)碘油0.5ml/只經(jīng)肝動脈灌注；E組：瘤內(nèi)rAd-p53（5X106 VP）直接導入。

8、介入術后2周處死實驗兔，先行大體病理觀察，再分別通過免疫組織化學方法檢測腫瘤細胞凋亡、血管內(nèi)皮因子（VEGF）及Von-Willebrand-factor（VIII因子）表達情況，對VIII因子陽性血管內(nèi)皮細胞進行微血管（MVD）計數(shù)，并結合其病理特征進行分析。 結果：各組治療前腫瘤體積無顯著性差異（P>0.05），治療后腫瘤體積及腫瘤增長率比較均不相同，兩兩比較分析顯示，任意兩組間比較均有顯著性差異（p<0.05），C、D、E

9、組較A、B組增長率低，C、D、E組組間有顯著性差異（p<0.05），以D組為低，說明B、C、D、E組有顯著抑制腫瘤生長作用，以D組最為明顯。各組間肝表面轉移灶及顯微鏡下瘤周0.5cm肝組織轉移灶不完全相同，兩兩比較結果示B組較A、C組低（P〈0.05），而B、D組間無顯著性差異（P>0.05），E組較C、D組高（P〈0.05），D組較E組低（P〈0.05）。五組腫瘤細胞平均凋亡率分別12.06％、14.56％、17.65％、18.69％

10、、19.65％，經(jīng)統(tǒng)計學分析C、D、E組較A、B組高（P<0.05），C、D組較E組低（P<0.05）。五組VEGF陽性率分別為50.0％、83.3％、83.3％、50.0％、50.0％，統(tǒng)計分析B組較A組高（P<0.05），D、C、E三組間有顯著性差異（P<0.05），D和E組間無顯著性差異（P>0.05）；五組間MVD不完全相同，分別為81.62±16.13、85.23±24.34、75.20±23.91、71.16±21.34、7

11、2.34±25.29，統(tǒng)計學分析B組較A組高（P<0.05），B組較D、C、E組高（P<0.05），D、C、E三組中以D組最高（P<0.05），D和E組間無顯著性差異（P>0.05）；MVD與VEGF之間存在較好的相關性。 結論：經(jīng)介入途徑導入重組人P53腺病毒基因能安全高效促進兔VX2肝癌細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成進而抑制肝癌細胞復發(fā)轉移；不同的rAd-p53介入導入方式對肝癌治療效果不同，以與常規(guī)介入治療聯(lián)合灌注最為有效，瘤