胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的實驗研究.pdf

1、該文以VNTR為靶抗原構建胰腺癌核酸疫苗,探索疫苗所誘生的免疫應答,以進一步研究疫苗對胰腺癌的治療作用.實驗共分為三部分:第一部分 胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的構建和體外轉染實驗;以人胰腺癌腫瘤相關抗原MUC1的最具免疫原性的序列片段VNTR為靶抗原,將其編碼基因克隆于真核表達載體pcDNA3.1/Myc-his(+)A質粒中,構建胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗.疫苗構建后進行體外轉染試驗,了解VNTR基因在哺乳動物細胞中的表達

2、.結論:自行構建的胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗序列完全正確,可在哺乳動物細胞中表達VNTR.第二部分 胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗免疫正常小鼠的評價;目的:以pcDNA3.1-VNTR/Myc-his(+)A重組質粒肌注免疫C57BL/6小鼠,研究疫苗是否也在體內表達VNTR,能否誘生MUC1特異性CTL就答為主的免疫應答.此外,該研究在進行免疫應答的評價時還包括了特異性抗體檢測和細胞因子檢測.結論:自行構建的胰腺癌MUC1-V

3、NTR核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠后可誘生VNTR特異的CTL應答和抗體應答.第三部分 HBcAg(1-144)基因、GM-CSF增強胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗免疫效果的研究;目的:抗原特異性免疫應答的誘生在很大程度上取決于機體對該抗原分子的處理和遞呈的效率.在這個過程中,任何促進疫苗DNA的攝取、翻譯和抗原的有效加工和提呈的分子疫苗設計和免疫策略都可能上調疫苗的免疫效果.為了進一步提高疫苗的免疫效果,在pcDNA3.1-VNT

4、R/Myc-his(+)A質粒中插入了HBcAg(1-144)基因(C144基因),構建了pcDNA3.1-VNTR-C144/Myc-his(+)A質粒,進一步以GM-CSF為免疫佐劑,免疫C57BL/6小鼠,研究GM-CSF和C144基因在疫苗誘發(fā)免疫應答中的作用.結論;C144基因和GM-CSF均可增強疫苗的免疫效果.以GM-CSF為免疫佐劑的pcDN3.1-VNTR-C144/Myc-his(+)A質粒在將來可能得以相對廣泛的應