櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒垂直傳播途徑的研究.pdf

1、櫛孔扇貝“急性病毒性壞死病毒”(Acute Viral Necrotic Virus；AVNV)已被證實(shí)為是一種對養(yǎng)殖櫛孔扇貝危害極大的病原體，開展其垂直傳播途徑的探索對于養(yǎng)殖生產(chǎn)中的該疾病的預(yù)防與控制、健康養(yǎng)殖模式的建立和健康苗種的培育具有重要的理論和實(shí)踐意義。鑒于目前櫛孔扇貝苗種主要來源于養(yǎng)殖海區(qū)半人工采苗的野生苗，僅憑櫛孔扇貝繁殖季節(jié)對產(chǎn)卵場AVNV的調(diào)查檢測，難以辨別親貝、卵、幼體、稚貝的一一對應(yīng)關(guān)系。于是，本文通過室內(nèi)人工育苗

2、的方法人為控制親本和下一代的對應(yīng)關(guān)系，同時(shí)，應(yīng)用建立的間接酶聯(lián)免疫吸附法對通過室內(nèi)人工育苗得到的樣品和貝類人工育苗場收集的樣品進(jìn)行大批量的定性檢測，應(yīng)用電鏡技術(shù)和間接免疫熒光技術(shù)對櫛孔扇貝的親貝卵巢、卵、受精卵和發(fā)育各期的幼體進(jìn)行定位檢測，從這兩方面驗(yàn)證該病毒是否存在垂直傳播途徑。 2006年10月和2007年5月開展了2個(gè)批次的室內(nèi)人工育苗，將親貝各放在一獨(dú)立育苗水體內(nèi)產(chǎn)卵、孵化，并進(jìn)行幼體培育。從40個(gè)獨(dú)立育苗水體中，采獲親

3、貝、卵各23個(gè)家系樣品，受精卵、D形幼蟲、殼頂幼蟲各12個(gè)家系樣品，眼點(diǎn)幼蟲2個(gè)家系樣品。2007年4月3日至20日，從貝類人工育苗場內(nèi)成功采集到櫛孔扇貝親貝、卵、受精卵等各期幼體。 利用已建立的AVNV間接ELISA法檢測體系，對采集到的櫛孔扇貝親貝、卵和各期幼體進(jìn)行檢測，探討其是否存在垂直傳播的可能性。檢測結(jié)果顯示：親貝家系樣品的性腺中可以檢測到病毒，而卵、受精卵、D形幼蟲、殼頂幼蟲、眼點(diǎn)幼蟲的家系樣品中均未檢測到病毒。由此

4、可以判斷，櫛孔扇貝AVNV垂直傳播途徑的可能性不大。 為了進(jìn)一步證實(shí)AVNV間接ELISA法的檢測結(jié)果，利用間接免疫熒光技術(shù)對攻毒后櫛孔扇貝的親貝卵巢進(jìn)行檢測。同時(shí)利用電鏡技術(shù)對發(fā)病疫區(qū)的櫛孔扇貝親貝卵巢和室內(nèi)人工育苗的親貝卵巢以及各期幼體進(jìn)行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在櫛孔扇貝的生殖腺內(nèi)發(fā)現(xiàn)了病毒，但是病毒的感染部位主要分布在生殖腺小管的外膜中，而卵原細(xì)胞是由生殖小管的內(nèi)生殖上皮產(chǎn)生的。由此可以判斷，病毒粒子并不能感染卵細(xì)胞。而且在扇貝