茶葉中大腸菌群檢測(cè)方法的研究.pdf

1、我國(guó)的食品衛(wèi)生微生物標(biāo)準(zhǔn)體系主要由菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌三大類構(gòu)成。大腸菌群是指在37℃,24h內(nèi)能夠發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌；大腸菌群作為糞便污染指示菌，既是細(xì)菌總量指數(shù)——菌落總數(shù)的一部分，又與腸道致病菌之間有著密切的相關(guān)性，因此大腸菌群在食品微生物指標(biāo)體系中占有舉足輕重的地位。 茶葉是我國(guó)的傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)農(nóng)副產(chǎn)品，不僅為國(guó)內(nèi)銷售的大宗產(chǎn)品，而且為我國(guó)傳統(tǒng)的出口創(chuàng)匯產(chǎn)品。然而近年來(lái)，我國(guó)茶葉出口遭

2、遇到嚴(yán)重的“綠色壁壘”，尤其是歐、美、日等國(guó)家不斷地制定更加嚴(yán)格和更廣泛的標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)暫還未將有害微生物列為茶葉標(biāo)準(zhǔn)中的強(qiáng)制性指標(biāo)，但歐盟、美國(guó)、加拿大和日本已作為試檢項(xiàng)目，俄羅斯要求對(duì)中國(guó)茶葉檢測(cè)黃曲霉毒素和霉菌(<1000cfu/g)。根據(jù)美國(guó)和日本對(duì)我國(guó)出口茶葉的檢驗(yàn)結(jié)果，我國(guó)茶葉中有害微生物主要表現(xiàn)為大腸桿菌、沙門氏桿菌等腸道感染細(xì)菌超標(biāo)，出口茶葉中大腸桿菌、黃曲霉毒索均時(shí)有檢出茶葉的微生物污染情況不容樂(lè)觀。這應(yīng)引起茶葉生產(chǎn)和銷售

3、單位以及有關(guān)主管部門的重視。 本文以綠茶、花茶、普洱茶和康磚茶為研究對(duì)象，對(duì)茶葉細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行了初步的調(diào)查并研究了大腸桿菌在茶葉中的存活規(guī)律；對(duì)茶葉污染大腸菌群進(jìn)行初步調(diào)查并進(jìn)行了各種檢測(cè)方法在茶葉檢測(cè)上的初步比較；研究探討了適合于茶葉檢測(cè)大腸菌群的檢測(cè)方法；對(duì)試驗(yàn)所得茶葉大腸菌群檢測(cè)方法進(jìn)行了分析與評(píng)價(jià)：最后對(duì)茶葉中的大腸菌群進(jìn)行了初步鑒定。最終得出以下結(jié)論： (1)所測(cè)茶葉菌落總數(shù)在2000～200000cfu/ml，

4、各種茶葉污染程度的依次遞增順序?yàn)榘b綠茶<散裝綠茶<花茶<普洱<康磚。茶葉水分含量和多酚類物質(zhì)含量對(duì)茶葉的菌落總數(shù)有一定的影響，茶葉多酚類物質(zhì)含量與菌落總數(shù)多少呈顯著負(fù)相關(guān)性。此外，大腸標(biāo)菌在茶葉中有一段時(shí)間的存活期，在一定程度上處于生長(zhǎng)繁殖狀態(tài)?？沙霈F(xiàn)細(xì)菌數(shù)回升的情況，說(shuō)明了檢測(cè)茶葉中的大腸菌群，將其作為衡量茶葉微生物衛(wèi)生狀況一個(gè)指標(biāo)有一定的必要性。 (2)從茶葉大腸菌群檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，茶葉大腸菌群污染范圍在<30～70MPN/

5、100g之間，污染程度從重到輕依次為再加工茶(花茶)>磚茶>包裝綠茶>散裝綠茶，由此看來(lái)茶葉受大腸菌群的污染程度與茶葉的加工工序及一些人為的污染途徑密切相關(guān)。經(jīng)不同方法檢測(cè)茶葉中大腸菌群的比較得出：LST法較國(guó)標(biāo)法和熒光法的檢出效果好，檢出靈敏度高，LST法較適于檢測(cè)茶葉大腸菌群。但LST法和國(guó)標(biāo)法的操作過(guò)程煩瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，有待于進(jìn)一步探討更加適合茶葉大腸菌群檢測(cè)，檢出率更高，操作簡(jiǎn)便快捷的檢驗(yàn)方法。 (3)經(jīng)一般常用大腸菌群檢測(cè)

6、三種初發(fā)酵培養(yǎng)基在茶葉中大腸菌群檢測(cè)的試用比較發(fā)現(xiàn)LST相對(duì)于GB和BGLB較適合于茶葉檢測(cè)，同時(shí)本試驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行改良得出結(jié)論：茶葉中大腸菌群檢測(cè)的最佳初發(fā)酵培養(yǎng)基為L(zhǎng)ST+0.3％吐溫培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為36小時(shí)左右，同時(shí)發(fā)現(xiàn)LST+0.3％吐溫培養(yǎng)基一步發(fā)酵檢測(cè)對(duì)茶葉大腸菌群的檢測(cè)起決定性作用，與最終的檢測(cè)結(jié)果符合率達(dá)90％左右，在茶葉大批量檢測(cè)中完全可以達(dá)到大腸菌群一步發(fā)酵檢測(cè)的效果。 由于茶葉自身特殊的原料、本身特

7、性及其加工工藝，為更加準(zhǔn)確的測(cè)定其大腸菌群值，需要對(duì)茶葉中損傷的大腸菌群進(jìn)行修復(fù)，研究發(fā)現(xiàn)用營(yíng)養(yǎng)肉湯修復(fù)茶葉損傷大腸菌群的修復(fù)時(shí)間為1.5小時(shí)。 通過(guò)對(duì)改良發(fā)酵管(LST+0.3％吐溫培養(yǎng)基)進(jìn)行敏感性和特異性測(cè)試發(fā)現(xiàn)：本實(shí)驗(yàn)研制的改良發(fā)酵管具有較高的檢測(cè)靈敏度和較強(qiáng)的特異性、抗干擾性，其中檢測(cè)靈敏度可達(dá)0～5cfu/ml。 最終通過(guò)以上試驗(yàn)得到我們茶葉大腸菌群檢測(cè)的新方法：營(yíng)養(yǎng)肉湯修復(fù)茶葉損傷大腸菌群1.5小時(shí)——接種