當歸不同栽培品種種子與藥材質(zhì)量的相關(guān)性研究.pdf

1、當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效。本課題以當歸7個選育新品種（品系）（岷歸1～5號已審定）為研究對象，針對其種子質(zhì)量參差不齊、缺乏質(zhì)量評價控制標準，種子與藥材質(zhì)量缺乏相關(guān)性研究，不同栽培品種藥材缺乏藥效學、安全性評價，優(yōu)良品種選育工作與實際生產(chǎn)脫節(jié)，未能進行有效推廣應(yīng)用等現(xiàn)狀問題，綜合應(yīng)用生藥學、中藥化學、藥理學、農(nóng)學等多學科的方法，集成ISS

2、R、HPLC、GC-MS、ICP-MS等技術(shù)，借助灰色關(guān)聯(lián)度、熵權(quán)TOPSIS模型等數(shù)學分析方法，首次系統(tǒng)評價了當歸不同栽培品種（品系）種子與藥材質(zhì)量的相關(guān)性，并與引種朝鮮當歸、不同產(chǎn)地市售當歸進行對比，揭示和探討了“形—質(zhì)—效”的科學內(nèi)涵，具有理論意義和應(yīng)用價值。主要研究結(jié)果如下：
　　1、當歸不同栽培品種、引種朝鮮當歸、市售當歸種子的遺傳多樣性研究
　　利用ISSR分子標記技術(shù)，建立并優(yōu)化了當歸種子的ISSR-PCR反應(yīng)

3、體系，篩選出17條能準確鑒別當歸不同栽培品種種子的引物，分析得出通過重離子輻照生物育種方法選育出的岷歸3號、岷歸4號遺傳信息豐富，可以作為分子標記輔助育種的首選研究材料。
　　2、當歸不同栽培品種種子的分級質(zhì)量標準研究
　　結(jié)合其他農(nóng)作物種子質(zhì)量標準，以凈度、千粒重、發(fā)芽率、種子活力等為指標，制定了已審定的當歸栽培品種種子的分級質(zhì)量標準及甘肅地產(chǎn)當歸種子質(zhì)量標準，為當歸種子的質(zhì)量控制及其規(guī)范生產(chǎn)提供了參考資料。
　　3

4、、當歸不同栽培品種種子微觀形態(tài)鑒別
　　利用掃描電子顯微鏡觀察分析得出，通過種子形狀、顏色等無法對當歸不同栽培品種種子進行鑒別，只能通過種子表面隆起及紋飾特征（一級紋理、二級紋理）進行準確鑒別，而且種子油室的個數(shù)及大小與種子含油量呈正相關(guān)。
　　對于目前當歸市售種子混雜的情況，通過種子形狀、顏色、翅的有無、隆起間距、油室的分布情況可對正品當歸與摻偽朝鮮當歸、東當歸進行準確鑒別。
　　4、當歸不同栽培品種種子含油量及組分

5、分析
　　首次鑒定出當歸種子油中11種脂肪酸成分，總結(jié)歸納出成分含量與種子成熟度的相關(guān)性，初步確定當歸主產(chǎn)地種子最佳采收期為8月22日至8月30日；主成分分析得出，己酸、油酸、癸酸是當歸種子共有的特征性脂肪酸組成；對樣品進行聚類分析可將當歸不同栽培品種（品系）及不同成熟度種子樣品進行分類。
　　5、當歸不同栽培品種種子質(zhì)量的綜合評價
　　以千粒重、發(fā)芽率、種子活力、生理生化指標、脂肪油含量為評價指標，借助灰色關(guān)聯(lián)分析方

6、法，構(gòu)建了評價當歸種子質(zhì)量的灰色關(guān)聯(lián)分析模型。結(jié)果表明，岷歸4號、岷歸3號種子質(zhì)量最優(yōu)；其次為岷歸2號、岷歸1號及岷歸5號；90-03及2000-01種子質(zhì)量相對較差；市售當歸種子中，道地產(chǎn)區(qū)岷縣、漳縣的種子質(zhì)量較優(yōu)，吉林、安國將東當歸、朝鮮當歸種子誤當作當歸種子出售。實驗表明，引種東當歸、朝鮮當歸、安國及吉林市售種子發(fā)芽率均低于52％，出苗率低于40%，質(zhì)量最差，不可用于生產(chǎn)。
　　6、當歸不同栽培品種藥材質(zhì)量的綜合評價

7、　　以揮發(fā)油、阿魏酸、丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯、歐當歸內(nèi)酯A、多糖、總黃酮浸出物含量為評價指標，借助TOPSIS法，構(gòu)建了基于多指標評價體系的當歸藥材質(zhì)量綜合評價TOPSIS模型，結(jié)果表明，岷歸4號、岷歸3號、野生當歸藥材質(zhì)量最優(yōu)，其次為岷縣、漳縣產(chǎn)當歸，以及栽培品系2000-01、栽培品種岷歸2號、岷歸5號、岷歸1號；引種朝鮮當歸、青海產(chǎn)當歸藥材質(zhì)量最差。其中岷歸4號揮發(fā)油含量分別是引種朝鮮當歸、青海產(chǎn)當歸的3.17、1.48倍，藁本內(nèi)酯

8、的含量是引種朝鮮當歸、青海產(chǎn)當歸的6.58、1.69倍。通過上述研究，建議當歸現(xiàn)行質(zhì)量標準增加丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯兩個成分指標的含量測定及藥材的特征指紋圖譜。
　　7、當歸不同栽培品種藥材與商品等級相關(guān)性研究
　　根據(jù)《七十六種藥材商品規(guī)格標準》，首次對當歸不同栽培品種（品系）藥材全歸進行等級劃分，對各等級比例進行統(tǒng)計，結(jié)果表明，岷歸3號、岷歸4號、岷歸5號以一等全歸為主，比例在35%以上，其次為二等全歸，比例在33%以上，

9、三等、四等全歸的比例不足30%，沒有五等全歸；岷歸1號、2000-01以二等全歸為主，比例為37.50～39.58%，三等、四等全歸的比例不足30%，五等全歸的比例在2%以上；岷歸2號以四等全歸為主，比例在33%以上，其次為一等全歸比例為22.92%，二等全歸比例為20.83%，三等全歸的比例不足20%，五等全歸的比例在4%以上；90-03以三等全歸為主，比例在33%以上，但一等全歸的比例僅為10.42%，二等全歸、四等全歸的比例均不足

10、26.00%，五等全歸的比例達8%以上。按商品等級中優(yōu)等全歸的比例得出，岷歸3號、岷歸4號、岷歸5號為優(yōu)良種子。此外，對商品當歸等級劃分提出了可行性建議。
　　8、當歸不同栽培品種藥材的藥效學評價
　　對當歸不同提取部分進行補血、活血、補氣作用藥效評價，研究結(jié)果表明，按照傳統(tǒng)方法煎煮提取對乙酰苯肼（APH）致血虛癥狀改善作用更為明顯；當歸70%乙醇提取部分對氣虛癥狀改善作用更為明顯。采用篩選出的有效提取部分對當歸不同栽培品種

11、（品系）藥材補血、活血、補氣作用進行藥效評價，岷歸3號、岷歸4號、野生當歸、岷縣及漳縣產(chǎn)當歸補血、活血、補氣作用優(yōu)于其他樣品。
　　9、當歸不同栽培品種藥材安全性評價
　　對當歸不同栽培品種（品系）、引種朝鮮當歸、野生當歸及不同產(chǎn)地當歸樣品進行了有機氯類農(nóng)藥殘留量、重金屬及有害元素含量測定，結(jié)果表明，90-03歸尾、2000-01歸尾、渭源產(chǎn)的當歸歸尾中γ-BHC超標，2000-01歸頭中銅（Cu）含量超標，其余樣品均符合《

12、中華人民共和國藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》規(guī)定。
　　利用灰色關(guān)聯(lián)度法對其安全性進行綜合評價得出，安全性綜合排名在前10名的為：岷歸4號歸尾、歸身，岷歸3號歸身，岷歸4號歸頭，岷歸2號歸身，岷歸3號歸尾，岷歸2號歸尾，野生當歸歸身、歸尾及歸頭。岷歸4號、岷歸3號、野生當歸、岷歸2號整體安全性優(yōu)于其他樣品。此外，當歸不同部位對重金屬及有害元素的富集程度不同，歸頭對重金屬鉛（Pb）、鎘（Cd）、銅（Cu）的富集程度較高，歸尾對重

13、金屬砷（As）、汞（Hg）的富集程度較高，歸身對重金屬的富集程度相對較低。
　　對輻照選育品種岷歸3號、岷歸4號藥材進行小鼠急性毒性實驗研究，結(jié)果表明，當歸輻照選育品種藥材毒性很小，未測得灌胃給藥小鼠半數(shù)致死量LD50，其最大耐藥量（MTD）>40g/kg，最大耐受量倍數(shù)相當成人60kg用量的120倍，實驗證明當歸輻照選育品種藥材無明顯毒性，臨床常用量安全可行。
　　10、當歸不同栽培品種種子與藥材相關(guān)性
　　通過對當