胰島素抵抗高血壓大鼠基因表達(dá)譜及糖脂消的作用機制研究.pdf

1、90年代初，我國對南北不同人群的調(diào)查結(jié)果顯示，高血壓的標(biāo)化患病率已達(dá)11.4％。胰島素抵抗/高胰島素血癥是高血壓、高血脂、心血管疾病和糖尿病等代謝相關(guān)疾病的“共同土壤”。因此，研究胰島素抵抗/高胰島素血癥與高血壓之間的內(nèi)在聯(lián)系，開發(fā)能夠同時具備降低血壓和改善胰島素抵抗的新型降壓藥物成為目前治療高血壓乃至代謝綜合征的熱點。中醫(yī)藥對胰島素抵抗綜合征的防治，己顯示良好的前景?？紤]到目前抗高血壓藥物改善IR的作用不明顯，對伴發(fā)的高脂血癥及糖耐量

2、減退效果更不肯定，因此，我們近年來從祖國醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)結(jié)合的視角出發(fā)，組方成藥物“糖脂消”。初步的結(jié)果顯示：“糖脂消”可改善IR、降低血脂、提高糖耐量，并在一定程度上降低血壓，經(jīng)急性毒理試驗觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。本研究擬通過用放免技術(shù)和基因芯片等技術(shù)，從整體水平和分子水平探討胰島素抵抗的分子機制和中藥的作用機制，從而為胰島素抵抗高血壓防治和中藥現(xiàn)代化提供理論和實踐依據(jù)。 研究目的：本研究通過高果糖喂養(yǎng)SD大鼠，復(fù)制胰島素抵

3、抗高血壓大鼠模型，糖脂消干預(yù)胰島素抵抗大鼠后，測定血壓、胰島素、瘦素、血脂、血糖等指標(biāo)，對胰島素抵抗相關(guān)因素進(jìn)行分析，并用基因表達(dá)譜芯片篩選胰島素抵抗相關(guān)基因和糖脂消對胰島素抵抗相關(guān)基因的影響，探討胰島素抵抗的發(fā)病機制和糖脂消防止胰島素敏感性下降、血壓升高及其相關(guān)機制。 研究方法：4-5周齡雄性SD大鼠，喂以高果糖飼料造成胰島素抵抗性高血壓大鼠模型，然后隨機將其分為5組，分別喂高果糖飼料及高果糖加高、中、低劑量的糖脂消和羅格列酮

4、4周。于第4周末腹主動脈取血，處死大鼠，取出大鼠比目魚肌。用放免法測定血清胰島素、瘦素水平；用穩(wěn)態(tài)模型(HOMA)評估胰島素抵抗(IR)；用酶法測定血清葡萄糖、甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白濃度；用原子吸收光譜分析法測定紅細(xì)胞內(nèi)鈣、鎂，并對檢測的指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。用中劑量糖脂消、對照組和模型組分別提取比目魚肌RNA，純化，逆轉(zhuǎn)錄標(biāo)記cDNA探針并純化。用基因表達(dá)譜芯片和標(biāo)記探針雜交，激光共聚焦系統(tǒng)掃描，GenePix4.0軟件分析Cy

5、3和Cy5兩種熒光信號的強度和比值，篩選胰島素抵抗相關(guān)基因和糖脂消對相關(guān)基因表達(dá)的影響。 研究結(jié)果： 1.高果糖飼料喂養(yǎng)大鼠，與普飼對照組相比，其收縮壓、血清胰島素和HOMA-IR明顯升高，并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.05)，血糖濃度無顯著差異(p＞0.05)；血清瘦素、膽固醇和甘油三酯水平升高(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05)，高密度脂蛋白水平降低(p＜0.01)。 2.高果

6、糖飼料組中，HOMA-IR與收縮壓、血清瘦素水平、甘油三酯和紅細(xì)胞內(nèi)鈣呈顯著正相關(guān)(p＜0.05-p＜0.001)；與高密度脂蛋白和紅細(xì)胞內(nèi)鎂呈顯著負(fù)相關(guān)(p＜0.05，p＜0.05)；與膽固醇無相關(guān)性(p＞0.05)。 3.高果糖飼料組中，血清瘦素水平與收縮壓、血清胰島素、HOMA-IR和甘油三酯呈顯著正相關(guān)(p＜0.05-p＜0.001)；與血糖、膽固醇、高密度脂蛋白和紅細(xì)胞內(nèi)鈣、鎂無相關(guān)性(p＞0.05)。 4.中

7、劑量糖脂消組大鼠血清胰島素、瘦素水平和HOMA-IR與模型對照組相比顯著降低(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05)，而低、高劑量組雖有同樣趨勢，但未顯示統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。 5.低、中劑量糖脂消組大鼠血清甘油三酯水平與模型對照組相比均降低(p＜0.05，p＜0.05)，高劑量組有下降趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)；與模型對照組比較，中劑量糖脂消組大鼠血清膽固醇水平降低(p＜0.01)，高密度脂蛋白水平明顯升高(

8、p＜0.01)，低、高劑量組雖有同樣的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。 6.中劑量糖脂消組大鼠紅細(xì)胞內(nèi)鈣與模型對照組相比顯著降低(p＜0.05)，紅細(xì)胞內(nèi)鎂顯著升高(p＜0.05)，而低、高劑量組雖有同樣趨勢，但未顯示統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。 7.用藥各組大鼠血糖與模型對照組比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。 8.用基因芯片篩選模型組和正常對照組的差異表達(dá)基因，重復(fù)2次差異表達(dá)的基因有140條，表達(dá)

9、上調(diào)的基因62條，表達(dá)下調(diào)的基因78條，其中有22條尚未在Genebank中登錄。 9.糖脂消治療后，重復(fù)2次差異表達(dá)的基因有95條，上調(diào)的有65條，下調(diào)的30條，其中有27條新基因。 結(jié)論 1.高果糖飼料喂養(yǎng)SD大鼠能形成胰島素抵抗性高血壓，并有高瘦素血癥，脂代謝紊亂。 2.高果糖飼料喂養(yǎng)大鼠其高血壓形成與胰島素抵抗、高瘦素血癥有關(guān)。 3.糖脂消能有效改善胰島素抵抗，調(diào)節(jié)血脂異常，并有一定的降壓