探針熔解曲線分析在HBV基因診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染導(dǎo)致的慢性乙型肝炎是一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生安全問題。目前，慢性乙型肝炎的個(gè)體化治療越來越受到重視，一個(gè)最佳的個(gè)體化治療方案的制定離不開患者體內(nèi)HBV的基因診斷信息。在臨床上，real-time PCR技術(shù)已被廣泛地應(yīng)用于HBV基因組的定量。對(duì)于HBV基因分型和HBV耐藥突變的檢測(cè)，目前急需建立一種簡(jiǎn)便高效的臨床檢測(cè)方法。針對(duì)這個(gè)問題，本論文以探針熔解曲線分析技術(shù)(melting

2、 curve analysis，MCA)為平臺(tái)，圍繞方便快捷的HBV基因分型方法和HBV耐藥突變檢測(cè)方法的建立展開了研究。
　　 第一章，對(duì)HBV以及其感染后的危害進(jìn)行了簡(jiǎn)單介紹，解釋了HBV基因定量的臨床意義，闡述了HBV基因分型和HBV耐藥突變檢測(cè)在慢性乙肝個(gè)體化治療中的重要作用，總結(jié)了常用的HBV基因診斷方法。最后，介紹了探針熔解曲線技術(shù)并提出將其應(yīng)用于HBV的基因診斷。
　　 第二章，建立了單管四色的HBV基因分

3、型檢測(cè)體系，能在一個(gè)PCR反應(yīng)管中區(qū)分A-H8種HBV基因型。體系的特異性高，檢測(cè)下限能達(dá)到10copies/反應(yīng)，能明顯區(qū)分10％以上的混合基因型感染情況。在對(duì)283份血清標(biāo)本的檢測(cè)中，只檢出B和C兩種基因型，檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序結(jié)果一致率達(dá)到100％。
　　 第三章，建立了兩管四色的HBV耐藥突變檢測(cè)體系，僅在兩個(gè)PCR反應(yīng)管（A和B）中就能檢測(cè)包含10個(gè)耐藥突變位點(diǎn)的23種突變類型，反應(yīng)體系A(chǔ)能檢測(cè)9種耐藥突變，反應(yīng)體系B能檢測(cè)