熒光pcr熔解曲線原理

1、熔解曲線耐藥結(jié)核檢測(cè)技術(shù)的原理及應(yīng)用隨著抗結(jié)核藥物的廣泛使用，耐多藥結(jié)核病人不斷增加。耐多藥結(jié)核?。╩ultidrugresistanttuberculosis，MDRTB）是指至少同時(shí)對(duì)利福平（rifampin，RIF）和異煙肼（isoniazid，INH）這兩種一線抗結(jié)核藥物耐藥。傳統(tǒng)的藥物敏感實(shí)驗(yàn)（Drugsusceptibilitytest，DST）時(shí)間長(zhǎng)，不利于耐多藥結(jié)核病患者的及時(shí)診治。因此，發(fā)展一種快速檢測(cè)耐多藥結(jié)核病的分

2、子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)對(duì)于耐多藥結(jié)核病的早期診斷和治療十分重要。一、熔解曲線耐藥結(jié)核檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥突變檢測(cè)試劑盒和結(jié)核分枝桿菌異煙肼耐藥突變檢測(cè)試劑盒于2013年1月獲頒國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)，同時(shí)，“中國(guó)—比爾蓋茨基金會(huì)”已將該試劑盒納入該基金會(huì)2013年產(chǎn)品驗(yàn)證目錄。2016年9月，SFDA批準(zhǔn)了另外三種試劑盒：“結(jié)核分枝桿菌氟喹諾酮類藥物耐藥突變檢測(cè)試劑盒”、“結(jié)核分枝桿菌鏈霉素耐藥突變

3、檢測(cè)試劑盒”和“結(jié)核分枝桿菌乙胺丁醇耐藥突變檢測(cè)試劑盒”，分別用于檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物、鏈霉素藥物和乙胺丁醇藥物耐藥性，可用于臨床上結(jié)核病的輔助診斷。INHahpC啟動(dòng)子區(qū)（44～30以及15～3位點(diǎn)）、inhA94密碼子、inhA啟動(dòng)子區(qū)（17～8位點(diǎn)）以及katG315密碼子EMBembB306、embB378380、embB406及embB497四個(gè)常見(jiàn)突變位點(diǎn)SMrpsL43、rpsL88密碼子，rrs513～517

4、位點(diǎn)和rrs905～908位點(diǎn)五、熔解曲線耐藥結(jié)核檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)①熔解曲線檢測(cè)試劑盒是目前市場(chǎng)上檢測(cè)項(xiàng)目最齊全的試劑盒，可實(shí)現(xiàn)MDR和XDR一步檢測(cè)②實(shí)驗(yàn)全程采用閉管法操作，無(wú)PCR后處理，降低了擴(kuò)增產(chǎn)物交叉污染的發(fā)生率[3]③檢測(cè)時(shí)間較短（在3小時(shí)內(nèi)完成），可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)判讀④可在現(xiàn)有的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀上操作，不需要昂貴的專用設(shè)備熔解曲線法與現(xiàn)有其他檢測(cè)方法相比，檢測(cè)項(xiàng)目更為齊全，并且可在3h左右獲得藥敏結(jié)果，適用于耐多藥結(jié)核病的快速