貴州珍珠半夏的離體培養(yǎng)及遺傳穩(wěn)定性的分子檢測.pdf

1、本文以貴州珍貴半夏品種一珍珠半夏為材料，對其離體快繁、適宜于遺傳改良的再生體系、愈傷組織培養(yǎng)，以及離體材料的體細胞遺傳變異等方面進行了探討，以期為半夏試管苗的大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，種質(zhì)資源的離體保存及遺傳轉(zhuǎn)化等提供技術(shù)平臺。取得以下結(jié)果： 1建立并優(yōu)化了珍珠半夏離體快繁體系采用珍珠半夏球莖為外植體，接種在MS+KT(1.0mg／L)+NAA(0.2-0.4mg／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂(0.7％)培養(yǎng)基中，可在30d內(nèi)完成芽的萌

2、發(fā)、增殖以及誘導(dǎo)生根等離體快繁的全過程。煉苗約15d后即可定植于大田。 2建立并優(yōu)化了葉柄和葉片的離體培養(yǎng)體系外植體類型、年齡，培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(PGR)種類及含量等因子對珍珠半夏再生有很大影響。葉柄接種于MS+BA(0.5mg／L)+IBA(0.2mg／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂(0.7％)的培養(yǎng)基中，獲得了較高的不定芽再生頻率；暗培養(yǎng)和AgNO3對其不定芽再生率影響不大。 珍珠半夏葉片再生的最適培養(yǎng)基為MS+T

3、DZ(0.2mg／L)+IBA(0.2mg／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂(0.7％)。 3愈傷組織培養(yǎng)外植體類型、基本培養(yǎng)基、生長素種類及濃度對珍珠半夏愈傷組織的誘導(dǎo)有一定影響。以球莖接種在MS+BA(1.0mg／L)+2,4-D(2.0mg／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂(0.7％)培養(yǎng)基上，出愈率最高，且可以有效的防止褐化，愈傷組織質(zhì)量較好，可用于長期繼代培養(yǎng)。 TDZ對愈傷組織的再分化效果優(yōu)于BA、KT及ZT，在MS

4、+TDZ(0.2mg／L)+IBA(0.5mg／L)+蔗糖(3.0％)+瓊脂(0.7％)培養(yǎng)基中，分化的不定芽生長狀況良好，且能正常生根。 4組培材料遺傳穩(wěn)定性的分子檢測采用96個隨機引物產(chǎn)生的良APD標記，對田間材料、組培材料第5代、10代和15代的珍珠半夏試管苗DNA進行檢測，沒有發(fā)現(xiàn)變異；采用78個隨機引物對珍珠半夏繼代第15代內(nèi)20個株系的DNA進行檢測，也未檢測到變異。因此在所用引物檢測范圍內(nèi)，珍珠半夏試管苗在15代以