江西特有植物突托蠟梅遺傳多樣性研究.pdf

1、突托蠟梅是江西特有的兼性克隆植物，現(xiàn)已被列為國家重點(diǎn)保護(hù)植物。本文從7個(gè)天然居群采集突托蠟梅樣本，確定了從突托蠟梅葉片中制備模板DNA的最佳方法，優(yōu)化了PCR循環(huán)參數(shù)，建立了ISSR—PCR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系，篩選出擴(kuò)增多態(tài)性片斷較多且擴(kuò)增產(chǎn)物穩(wěn)定的引物，通過10條ISSR引物對(duì)213個(gè)突托蠟梅個(gè)體的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)突托蠟梅居群的遺傳結(jié)構(gòu)和克隆多樣性進(jìn)行了研究。 研究結(jié)果表明，與CTAB法、SDS法、高鹽低pH值法、SD

2、S-CTAB法、SDS-蛋白酶K法相比，改良的CTAB法提取的DNA OD260/OD280值最好，濃度最高，是提取突托蠟梅基因組DNA的有效方法。ISSR擴(kuò)增條件為：20μL PCR反應(yīng)體系中，1×PCR緩沖液，2．0 U Taq DNA聚合酶，1．5 mmol/L MgCl2，0．6μmol/L引物，0．15 mmol/L dNTPs，50 ng模板DNA。最佳擴(kuò)增反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，50．8℃～5

3、8．3℃退火45 s，72℃延伸2 min，40個(gè)循環(huán)；最后在72℃延伸5 min。 共對(duì)100條ISSR引物進(jìn)行了篩選，分別篩選出擴(kuò)增條帶較多、信號(hào)強(qiáng)、背景清晰的10條ISSR引物用于7個(gè)居群DNA樣本擴(kuò)增，共擴(kuò)增出74個(gè)位點(diǎn)，其中39個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分比為52．7％。 根據(jù)不同個(gè)體的擴(kuò)增圖構(gòu)建了0、1矩陣（其中模糊帶和弱帶忽略不計(jì)）輸入計(jì)算機(jī)。對(duì)ISSR數(shù)據(jù)處理結(jié)果如下：物種水平上，多態(tài)位點(diǎn)百分比P為52．7

4、％，Nei's基因多樣性指數(shù)H為0．1572，Shannon信息指數(shù)I為0．2408，平均克隆尺度Nc為1．1390，基因型比率PD為0．8780，Simple多樣性指數(shù)D為0．998；居群水平上，多態(tài)位點(diǎn)百分比P為21．62％～41．8g％，Nei's基因多樣性指數(shù)H為0．0958～0．1538，Shannon信息指數(shù)I為0．0946～0．2220，平均克隆尺度Nc為1．0000～1．2310，基因型比率PD為0．8620～1．000

5、0，Simple多樣性指數(shù)D為0．9840～1．0000，均勻度指數(shù)E為0．0000～0．7840，居群間的分化系數(shù)（Gst）為0．2489，AMOVA分析表明，26．37％的遺傳變異存在于居群間，表明居群間有一定的遺傳分化。Mantel檢測(cè)表明地理距離和Nei's遺傳距離間相關(guān)性顯著（r=0．712，p<0．001）。由UPGMA聚類分析得知安遠(yuǎn)的4個(gè)居群聚為一支，會(huì)昌的3個(gè)居群聚為一支。 突托蠟梅表現(xiàn)出較低的遺傳多樣性和較高