中國特有植物羊躑躅遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、從 5 個天然居群(金溪、廬山、井岡山、武寧和瑞昌)采集羊躑躅樣品，用改良的2×CTAB法從樣品葉片中提取基因組DNA，優(yōu)化了PCR循環(huán)參數(shù)，建立了ISSR-PCR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系，從167條隨機(jī)引物中篩選出多態(tài)性好且清晰度高的引物，并用篩選出的引物對39個羊躑躅個體的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，對羊躑躅居群的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用丙酮對樣品進(jìn)行預(yù)處理可以提高產(chǎn)物的純度。ISSR-PCR擴(kuò)增條件經(jīng)過優(yōu)化后確

2、定為在25μl 的 ISSR-PCR 反應(yīng)體系中，各項(xiàng)因子最適條件為：模板 DNA30～45ng/25 μl，Mg<'2+>2.0～2.5mmol/l，dNTPs0.1～0.15mmol/l，引物0.3～0.4 μmol/l，Taq 酶0.5～1.0U；10×PCR buffer 2.5μl，加ddH<,2>O至25μl。其熱循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性5min，之后進(jìn)行30個循環(huán)(94℃1min，55℃30s，72℃2min)，最后72℃

3、延伸7min后在4℃終止反應(yīng)。 本研究對167條ISSR引物進(jìn)行了篩選，篩選出多態(tài)性好且清晰度高的13條引物用于5個居群39個樣本的擴(kuò)增。結(jié)果共檢測到196個位點(diǎn)，其中190個為多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率(PPB)為96.94％。 根據(jù)不同個體的擴(kuò)增圖譜構(gòu)建了0、1矩陣輸入計(jì)算機(jī)。數(shù)據(jù)處理結(jié)果如下：POPGENE 分析表明羊躑躅具有豐富的遺傳多樣性(H=0.3342，I=0.5007)。Nei’s遺傳多樣性和AMOVA

4、分析表明，居群間存在有一定的遺傳分化(Gst分別為0.5084和0.5320)。由UPGMA聚類分析可知金溪、廬山、井岡山和武寧四個居群聚為一支，瑞昌居群單獨(dú)作為一支。由Mantel相關(guān)性檢測可知，居群的遺傳距離與地理距離有一定的相關(guān)性，但并不顯著。 通過對羊躑躅遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的研究，提出了保護(hù)羊躑躅遺傳多樣性的策略：1．實(shí)施就地保護(hù)和遷地保護(hù)策略：2．建議在居群間進(jìn)行植株和幼苗移栽，以提高居群間的基因交流，以最大限度保護(hù)