北方玉米絲軸黑粉菌的遺傳多樣性評價及GFP基因在病理學研究中的應用.pdf

1、本研究利用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)技術分析了北方玉米絲軸黑粉菌的遺傳多樣性和遺傳分化，建立了根癌農(nóng)桿菌介導的玉米絲軸黑粉菌的遺傳轉化體系，將外源gfp加基因導入玉米絲軸黑粉菌并成功表達。獲得的主要結果如下：
　　 1.篩選出26個擴增穩(wěn)定、帶紋清晰的RAPD引物，對從玉米絲黑穗病發(fā)生嚴重的大部分北方省市收集分離的68個玉米絲軸黑粉菌菌株進行了DNA遺傳多樣性分析，結果表明，RAPD譜帶多態(tài)性為98.33％，北方玉米絲軸黑

2、粉菌具有豐富的遺傳多樣性，遺傳分化明顯；種群內遺傳變異小于種群間遺傳變異。玉米絲軸黑粉菌遺傳分化除明顯受地理阻隔影響外，也可能與玉米種子調運過程中攜帶病菌基因的遺傳遷移相關。
　　 2.利用NTSYS軟件進行系統(tǒng)聚類分析表明，相似系數(shù)為0.76閥值時，68個菌株可劃分為13個類群。研究結果完善和豐富了我國玉米絲軸黑粉菌遺傳多樣性評價研究，對玉米抗病資源篩選和抗病育種具有重要參考價值。
　　 3.構建帶有報告基因gfp的重

3、組雙元質粒載體pCAMBIA0611，利用熱擊法導入根癌農(nóng)桿菌，并成功實現(xiàn)了對玉米絲軸黑粉菌的轉化。
　　 4.對不同的根癌農(nóng)桿菌菌株、不同的玉米絲軸黑粉菌擔孢子成熟度、不同的根癌農(nóng)桿菌濃度等轉化條件的比較研究，建立了根癌農(nóng)桿菌介導的玉米絲軸黑粉菌的遺傳轉化體系，結果表明根癌農(nóng)桿菌GV3101介導，玉米絲軸黑粉菌擔孢子在CM中培養(yǎng)3d，根癌農(nóng)桿菌菌液OD600值為0.4左右時，轉化效率最高，能達到280個轉化子/106個細胞。<

4、br>　　 5.將轉化菌株與野生型菌株混合于PD液體中搖床培養(yǎng)，顯微鏡檢發(fā)現(xiàn)兩者能彼此結合，產(chǎn)生雙核菌絲。說明外源基因的插入沒有導致與交配結合相關的基因發(fā)生突變。
　　 6.利用注射法將結合的雙核菌液接種于玉米自交系黃早四，二葉一心期PCR檢測葉片表明轉化菌株侵入到玉米葉片中，說明轉化菌株對玉米具有一定的侵染力。成熟期田間能觀察到發(fā)病植株，并有玉米絲軸黑粉菌冬孢子產(chǎn)生，表明轉化菌株具有一定的致病性，侵染植株后能導致發(fā)病。