葛根素微生物糖基化作用小試及固定化酶研究.pdf

1、葛根素(puerarin),4’,7-二羥基-8-β-D-葡萄糖基異黃酮(8-C-β-D-Glucopyranosyl-7,4'-hydroxy—Isoflavone),目前在臨床上廣泛應(yīng)用于心腦血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、急性酒精中毒及腫瘤等疾病的治療,但是存在水溶解度低和生物利用度低等缺點(diǎn)。對(duì)葛根素結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改造,改善其水溶性和脂溶性,提高其生物利用度及選擇性,最終增強(qiáng)其藥理活性,是當(dāng)前葛根素研究的熱點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)室丁娟芳和

2、蔣潔蓉等人篩選得到一株氧化微桿菌Microbacteriumoxydans CGMCC1788,通過該菌的靜息細(xì)胞及細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)化可以將葛根素轉(zhuǎn)化為葛根素-7-O-葡萄糖苷。丁娟芳結(jié)合多種蛋白純化方法從該菌中分離純化得到葛根素糖基化酶,并研究了其酶學(xué)性質(zhì)。于賜剛利用乙醇滲透化處理該菌細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)可將葛根素轉(zhuǎn)化為葛根素-7-O-果糖苷。
　　 本文采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化了工業(yè)培養(yǎng)基,利用5 L發(fā)酵罐培養(yǎng)氧化微桿菌,細(xì)胞經(jīng)乙醇滲透化處理2

3、h,大量制備葛根素-7-O-果糖苷。采用雙柱串聯(lián)層析系統(tǒng)分離純化葛根素-7-O-果糖苷,以10％乙醇作為洗脫液,10 mL/min流速洗脫,收集液經(jīng)濃縮干燥,最終得到了葛根素-7-O-果糖苷晶體3.84 g,HPLC檢測(cè)純度達(dá)97％。
　　 本文比較了DEAE-纖維素、CM-纖維素對(duì)葛根素糖基化酶的固定效果,結(jié)果表明DEAE-纖維素固定化載體的酶活高出CM-纖維素固定化載體3.6倍,由此選定DEAE-纖維素作為固定化載體。本文也

4、嘗試了DEAE-纖維素的戊二醛交聯(lián)固定化技術(shù),結(jié)果表明交聯(lián)載體經(jīng)0.5mol/L的NaCl溶液解吸后,酶活損失率為85％左右,未達(dá)到固定化目的。
　　 以DEAE-纖維素為載體,通過傳統(tǒng)的離子吸附法固定化葛根素糖基化酶,從加酶量、吸附pH方面分析考察對(duì)固定化的影響,確定最佳固定化條件為:0.5gDEAE-纖維素,加酶量為12mg/g DEAE-纖維素,吸附pH為8.0。固定化載體酶活為1.2U,活力回收率達(dá)到54.8％。