醫(yī)用三氧與中藥對(duì)醋氨酚犬中毒性肝病的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景和目的： 伴隨著新藥的不斷問世和臨床聯(lián)合用藥的增加，藥物性肝病的發(fā)生率居高不下，約占所有藥物損害病例的10％～15％，僅次于皮膚粘膜損害和藥物熱。國(guó)外報(bào)告在暴發(fā)性肝衰竭患者中，有20％～50％與藥物有關(guān)。在美國(guó)醋氨酚中毒排在藥物性中毒的首位。藥物性肝病可表現(xiàn)為肝細(xì)胞壞死、膽汁淤積、慢性肝炎或肝硬化等，嚴(yán)重者出現(xiàn)暴發(fā)性肝衰竭，肝細(xì)胞突然大量壞死，發(fā)生肝昏迷漸至死亡。當(dāng)前藥物性肝病的治療主要是祛除病因治療，即停用肝損害藥物，

2、并施以“保肝”治療藥物(多為中藥提取物、中成藥或還原型谷胱甘肽制劑)。但是，臨床實(shí)踐中很多情況下例如抗結(jié)核、腫瘤化療、器官移植后的免疫抑制等藥物，即使出現(xiàn)肝損害也是不能停用的。然而當(dāng)前大量“保肝”治療藥物并不具備預(yù)防性應(yīng)用肝臟保護(hù)作用。此種情況下，就須考慮尋找能夠預(yù)防藥物性肝損害的方法。 首先聚焦醫(yī)用三氧，醫(yī)用三氧具有其特殊生物藥理學(xué)特點(diǎn)，近年已應(yīng)用于肝病治療及免疫調(diào)節(jié)治療。醫(yī)用三氧應(yīng)用于疾病治療已有近50年歷史。隨著對(duì)三氧的作

3、用機(jī)制研究積累，現(xiàn)已部分明確了三氧具有某些特殊的生物學(xué)與藥理學(xué)特性：(1)增加紅細(xì)胞代謝，改善微循環(huán)；(2)作為強(qiáng)氧化物可誘導(dǎo)激活組織細(xì)胞產(chǎn)生抗氧化酶，增強(qiáng)組織細(xì)胞清除自由基的能力；(3)低濃度三氧具有免疫激活和調(diào)節(jié)活性。 中藥治療，在藥物性肝病的治療中占有非常重要的地位。臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明中醫(yī)藥治療藥物性肝病有肯定的療效，尤其在健脾護(hù)肝、利膽退黃、活血化瘀等方面有獨(dú)特的療效。而且合理地選擇運(yùn)用中藥，不良反應(yīng)小。目前對(duì)于醫(yī)用三氧

4、的基礎(chǔ)研究主要集中在生物學(xué)與藥理學(xué)特性方面，然而預(yù)防性治療作用報(bào)道較少，僅國(guó)外有在器官缺血再灌注前應(yīng)用三氧可以減輕器官損傷的報(bào)道。本研究首次應(yīng)用醫(yī)用三氧及中藥對(duì)醋氨酚犬急性中毒性肝病的預(yù)防性治療作用進(jìn)行初步探索，并將二者療效進(jìn)行平行對(duì)比，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1．實(shí)驗(yàn)藥物 受試藥物是醫(yī)用三氧及中藥護(hù)肝方，醫(yī)用三氧由三氧發(fā)生器(德國(guó)哈斯樂OZONOSAN alpha Plus 1107)制備，是

5、純氧與三氧的混合氣體，本研究用三氧濃度為20 mg/L。中藥護(hù)肝方組成：黃芪30 g，黨參20 g，白術(shù)20 g，生地黃15 g，熟地黃15 g，丹參15 g，白花蛇舌草10 g，板藍(lán)根10 g。 2．模型制作 將醋氨酚溶解于二甲基亞砜(DMsO)中配制成600g/L的濃度，新鮮配制使用。用配制好的醋氨酚溶液采用多點(diǎn)皮下注射：首次劑量為750mg/kg體質(zhì)量，首次注射后9h和24h分別進(jìn)行第2次和第3次注射，用量均為20

6、0mg/kg體質(zhì)量。 3．分組和給藥健康雜種犬24只，隨機(jī)分為4組，分別是正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，中藥預(yù)處理組和醫(yī)用三氧預(yù)處理組，每組6只。中藥預(yù)處理組予護(hù)肝方直腸灌藥，每只犬按4.14g/kg劑量，1次/日，三氧預(yù)處理組予醫(yī)用三氧直腸灌注，每次150ml，1次/日，共15天。然后除正常對(duì)照組外，其余三組犬同時(shí)進(jìn)行醋氨酚皮下注射造模。 4．觀察及檢測(cè)指標(biāo)觀察犬的精神，飲食，行動(dòng)，大小便等。于醋氨酚造模前及造模后24，48

7、，72，96 h，7，14 d抽血檢測(cè)肝功能指標(biāo)(ALT、AST、TBIL)、血氨(AMMO)、凝血酶原時(shí)間(PT)、尿素氮(BUN)、肝組織病理檢查。實(shí)驗(yàn)犬在實(shí)驗(yàn)前以及醋氨酚注射后死亡時(shí)或存活14d時(shí)取肝臟組織做病理觀察。5．統(tǒng)計(jì)方法用SPSS軟件(13.0版處理)，各數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)屬重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)，故首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析，然后對(duì)各組分別進(jìn)行組內(nèi)重復(fù)測(cè)量的方差分析，時(shí)間因素間有顯著性差異時(shí)進(jìn)行LSD

8、多重比較。對(duì)各個(gè)測(cè)試時(shí)間點(diǎn)的組間數(shù)據(jù)，采用One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析，有顯著性差異時(shí)進(jìn)行多重比較。P<0.05為有顯著性差異。ANOVA進(jìn)行方差分析時(shí)首先考察方差齊性。 結(jié)果： 1．犬的一般狀態(tài)各組犬醋氨酚造模前精神良好，呼吸平穩(wěn)，飲食及二便正常，對(duì)外界刺激反應(yīng)靈敏。造模后，各組犬均表現(xiàn)為不同程度的精神困倦，鞏膜黃染，攝食量減少，嘔吐，小便黃，日漸消瘦；有些犬出現(xiàn)煩躁，醉酒樣步態(tài)；有些犬精神萎靡，嗜睡，對(duì)外界

9、刺激反應(yīng)遲鈍，傷口難以止血。以上表現(xiàn)在首劑醋氨酚注射后48h～72h最為明顯，且模型對(duì)照組最為嚴(yán)重。 生存期比較：醋氨酚模型對(duì)照組兩只犬在造模后48 h出現(xiàn)呼吸困難，昏睡，漸至昏迷，最終分別在造模后56，75 h左右死亡，本組其余犬及中藥預(yù)處理組與三氧預(yù)處理組犬造模后14d仍存活。 2．肝臟形態(tài)學(xué)觀察2．1肝臟形態(tài)學(xué)變化2．1．1肉眼觀正常犬肝臟呈紅褐色、質(zhì)軟而脆。模型對(duì)照組注藥造模后肝臟體積縮小，肝表面有塊狀瘀斑，肝臟

10、包膜皺縮，有腹水，腸系膜靜脈和胃底靜脈曲張。中藥預(yù)處理組及三氧預(yù)處理組的肝臟體積縮小不明顯，瘀斑少，包膜完好。2．1．2組織病理學(xué)檢查正常犬肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞呈索狀排列，形態(tài)正常。注藥造模后14天，模型對(duì)照組肝索紊亂，匯管區(qū)膽管增生，肝細(xì)胞呈彌漫性濁腫，片狀壞死、嗜酸性變、肝內(nèi)淤膽，部分區(qū)域肝竇擴(kuò)張，充血，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型對(duì)照組相比，中藥預(yù)處理組和三氧預(yù)處理組的肝組織病理變化程度輕、病灶范圍小，肝細(xì)胞氣球樣變和脂肪變性明顯

11、。 3．生化指標(biāo)分析造模前各個(gè)指標(biāo)組間無顯著性差異(P均>0.05)，表明開始時(shí)的分組是均衡的。不同時(shí)間及不同組間均有顯著性差異(P=0.000)，重復(fù)因素7個(gè)不同水平(7個(gè)時(shí)間點(diǎn))間差異有顯著性意義，即各組各項(xiàng)指標(biāo)均隨時(shí)間變化，時(shí)間與組別存在交互效應(yīng)(P=0.000)，從各項(xiàng)指標(biāo)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)看，各組的區(qū)別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。造模前后不同時(shí)間有顯著性差異，三氧組、中藥組與模型對(duì)照組均如此。模型對(duì)照組ALT,AST,TBIL，PT

12、指標(biāo)在注射醋氨酚造模后24 h即升高，72 h時(shí)達(dá)高峰：AMMO在造模后48 h達(dá)高峰；BUN在造模后24 h達(dá)高峰。 與模型對(duì)照組比較：三氧組和中藥組AIT明顯低于模型對(duì)照組(三氧組在造模后24，48，72，96 h，7，14 d；中藥組造模后24，72，96 h，7d)，有顯著性差異(P<0.05或0.01)；同樣三氧組和中藥組AST，TBIL，AMMO升高也較模型對(duì)照組低，有顯著性意義(P<0.05或0.01)。三氧組和中

13、藥組PT值在造模后48，72，96h比模型對(duì)照組低，有顯著性差異；三氧組BUN造模后24h顯示出明顯低于模型對(duì)照組，有顯著性差異。 三氧組與中藥組相比，造模后7，14dALT明顯低于中藥組，有顯著性差異；三氧組造模后7 d時(shí)AST也顯著較低；造模后96 h，7 d，三氧組TBIL顯著較低；三氧組PT明顯短于中藥組(造模后48 h，72 h)；三氧組AMMO明顯較低(造模后24 h，48 h)；三氧組BUN明顯低有顯著性意義(造模

14、后24h)。 結(jié)論： 中藥護(hù)肝方與醫(yī)用三氧的直腸灌注應(yīng)用能夠有效預(yù)防醋氨酚所致犬急性中毒性肝損害，抑制血氨升高和PT的延長(zhǎng)，且醫(yī)用三氧效果優(yōu)于護(hù)肝方。醫(yī)用三氧作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)免疫，改善組織器官微循環(huán)，激活肝臟的自由基等毒性代謝產(chǎn)物清除系統(tǒng)，提高肝臟的抗氧化能力有關(guān)，中藥則具有益氣解毒，涼血活血之功效。本實(shí)驗(yàn)為三氧與中藥的臨床預(yù)防應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。醫(yī)用三氧及中藥護(hù)肝方有可能成為預(yù)防藥物性肝病的新方法。二者臨床療效有待在