阿糖胞苷代謝與臨床研究.pdf

1、第一部分：大劑量阿糖胞苷藥代動力學研究 目的與方法:應用反相高壓液相色譜(HPLC)技術，研究8例急性髓細胞白血病緩解后使用大劑量阿糖胞苷(HDAra-C)的臨床藥代動力學。 結果: ⑴發(fā)現用HDAra-C 3.0g/次靜滴2小時，藥物在血漿中達到高峰濃度時間為90分鐘，峰濃度平均為5.59μg/ml，滴注結束后迅速下降，4小時后降至0.14μg/ml。 ⑵Ara-C在體內以雙相清除，t1/2α、t1/2

2、β平均分別為9.6分鐘和192分鐘，體內平均清除率455.7L/h，k10 4.42，k12 1.24，k21 0.61。 ⑶阿糖尿苷(Ara-U)為Ara-C的代謝產物，在滴注結束后20分鐘達峰，平均峰濃度為25.88ug/ml，然后緩慢下降，至下次滴注前僅少量殘留于體內。 ⑷血藥濃度－時間曲線下面積(AUC)值與患者的體表面積無一定關系，主要取決于藥物在體內的清除率，二者呈負相關，并且AUC值與患者的預后呈正相關。

3、 結論:用此劑量作為AML緩解者強化治療，能達到有效的血漿濃度，其AUC值與預后有關。 第二部分大劑量阿糖胞苷對AML鞏固治療的療效和毒副反應觀察 目的與方法:以阿糖胞苷3g，靜滴2~3 h，q12h，連續(xù)應用6個劑量為1療程，共用5療程，以探討大劑量阿糖胞苷(HDAra-C)對急性髓細胞白血病緩解后鞏固治療的無病生(DFS)和總生存(OS)影響，并觀察其不良反應及采用相應措施的效果。 結果: ⑴中

4、位完全緩解期為13.5（3~167）個月，中位DFS為17.5（3~167）個月，中位總生存率（OS）為22.5（7~169）個月。 ⑵3年和5年的DFS分別為55％和51％，3年和5年OS分別為68％和54％。 ⑶骨髓抑制較為明顯，非造血系統(tǒng)副反應輕微，在采用相應的輔助措施后得到改善。 結論:HDAra-C用于AML的緩解后鞏固治療，可望縮短化療時間，提高無病生存率，改善生活質量，且患者能耐受治療中所出現的不良

5、反應。AML緩解后應用HDAra-C作鞏固治療安全而有效。 第三部分氟達拉濱聯合阿糖胞苷對細胞代謝酶的影響 目的:觀察氟迖拉濱(Fludarabine)、阿糖胞苷(Cytarabine)聯合粒細胞集落刺激因子（G-CSF）在體外對HL60、HL60R細胞株及5例AML患者的骨髓細胞其細胞代謝酶的影響，從而闡述氟迖拉濱對阿糖胞苷的增敏機制，并研究G-CSF最佳運用時機。 方法:分別取對數生長期的HL60、HL60R

6、細胞，用六孔板，每孔加入5ml細胞，濃度為6*106，將二種細胞株均分為五組，單加Ara-C(A)、單加 Flu (F)、Flu+Ara-C(FA)、 G-CSF+Ara-C(GA)、 G-CSF+Flu+Ara-C(FLAG)，收集加藥后不同時間段的細胞標本，用實時熒光定量PCR法檢測細胞內五種不同代謝酶5’－NT、DCK、CDD、RRM1、RRM2的基因表達情況，同時用流式細胞儀檢測加G-CSF后細胞周期的變化，通過比較判斷這五種代

7、謝酶可能參與的作用。此外，收集了5例AML患者的骨髓細胞，并對這些細胞進行類似于細胞株的處理，用同樣方法檢測了原代細胞內五種不同代謝酶的基因表達情況。 結果: ⑴細胞加用G-CSF孵育24小時后，S期細胞百分比HL60從(54.73±0.95)％到(59.04±1.64)％，HL60R從(45.17±2.02)％到(51.74±2.43)％(P<0.05)；而用G-CSF孵育12小時S期細胞百分比變化不大。 ⑵H

8、L60細胞，在加入G-CSF后24小時再加Ara-C與單用Ara-C在4小時后相比，GA組NT、CDD、RRM1和RRM2均比A組低，而DCK比A組高。在Ara－C 800μg/ml，Flu20μg/ml濃度下，Flu會進一步抑制RRM1, RRM2的表達來發(fā)揮作用，其中DCK的作用不明顯。在加入G－CSF10ng/ml后，5’-NT和RRM1, RRM2被誘導低表達，尤其是24hFLAG更為明顯。 ⑶HL60R細胞，在Ara－

9、C 800ug/ml，Flu 20ug/ml，G-CSF 10ng/ml的藥物濃度下，Flu會進一步抑制5’NT、RRM1, RRM2的表達來發(fā)揮作用。相對于FA而言，24hFLAG對RRM1, RRM2的抑制更明顯，并存在部分DCK表達的增加而發(fā)揮作用。 ⑷難治復發(fā)AML原代細胞，在Ara－C 800ug/ml，Flu 20ug/ml，G-CSF 10ng/ml的藥物濃度下，加完藥后4小時Flu會進一步抑制RRM1, RRM2

10、的表達。相對于FA而言，24hFLAG對RRM1, RRM2抑制作用更強，并增加DCK的表達。 結論: ⑴氟達拉濱對阿糖胞苷的增敏作用主要通過對核苷酸還原酶抑制作用增強而實現。 ⑵氟達拉濱聯合G-CSF能降低5‘-核苷酸酶的基因水平，促使Ara-C向Ara-CMP磷酸化方向發(fā)展，從而促進Ara-CTP的形成。 ⑶ G-CSF提前24小時應用較提前12小時可以使S期細胞明顯增加，核苷酸還原酶的活性明顯降低，