雞視頂蓋中央灰質(zhì)層的發(fā)育及其神經(jīng)元形態(tài)研究.pdf

1、雛雞中腦的視頂蓋為鳥類視覺信息通路的重要通路，經(jīng)染色后可以觀察到明顯的分層構(gòu)造。本試驗(yàn)采用尼氏體染色法以及快藍(lán)(Fast Blue，F(xiàn)B)逆行標(biāo)記結(jié)合細(xì)胞內(nèi)注射熒光黃(Lucifer Yellow, LY)的方法:先向雛雞圓核內(nèi)注射快藍(lán)(Fast blue，F(xiàn)B)逆向熒光標(biāo)記視頂蓋中央灰質(zhì)層（Stratum griseum central，SGC）神經(jīng)元，84h后灌流固定、制作300μm厚的中腦振動(dòng)切片、熒光顯微鏡下通過顯微操作系統(tǒng)向F

2、B標(biāo)記的SGC神經(jīng)元內(nèi)微電泳法注入熒光染料熒光黃。分別對(duì)不同胚齡的雞胚和雛雞進(jìn)行染色，以觀測(cè)不同胚齡雞胚SGC的發(fā)育情況和雛雞SGC神經(jīng)元的細(xì)胞形態(tài)，并且對(duì)細(xì)胞內(nèi)注射熒光黃的方法進(jìn)行初步探索，為進(jìn)一步對(duì)雞的信息通路提供參考。
　　結(jié)果顯示，在雞的不同胚齡，SGC的厚度在視頂蓋總厚度的比例有差異。在E11，E14，E17以及E20時(shí)期，SGC的厚度為(132.95±14.80)μm，(150.38±37.83)μm，(167.88±

3、10.05)μm，(171.09±31.98)μm(n=40);不同胚齡時(shí)期SGC在視頂蓋總厚度中所占比例分別為24.23％，26.88％，28.92％，29.42％。由此推測(cè)，SGC的厚度呈現(xiàn)最初增殖較快，后期趨于平緩，E20時(shí)發(fā)育停止。熒光黃在雛雞細(xì)胞內(nèi)注射后，可以在SGC神經(jīng)元觀察到的主要形式有三角形、橢圓形、梭形和多邊形，最常見的一種是三角形。對(duì)63例SGC細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量和生物統(tǒng)計(jì)測(cè)得細(xì)胞體的面積平均為(336.91±70.81)

4、μm2，樹突野平均為（121.27±49.54）μm，長(zhǎng)徑(29.38±6.44)μm，短徑(14.20±1.65)μm。劃定細(xì)胞長(zhǎng)直徑大于30μm為，20～30μm之間以及小于20μm的分別為大、中、小細(xì)胞，SGC神經(jīng)元的測(cè)定結(jié)果為，大細(xì)胞約占46.03％(n=29)，中型細(xì)胞約占46.03％(n=29)，小型細(xì)胞約占7.94％(n=5)。由此可知，在SGC中主要細(xì)胞為大、中型細(xì)胞。規(guī)定樹突野范圍小于90μm的窄樹突野，范圍在90μm

5、～150μm之間的為中樹突野，樹突野長(zhǎng)度大于150μm的為寬樹突野。試驗(yàn)所得63個(gè)細(xì)胞對(duì)SGC神經(jīng)元進(jìn)行的測(cè)定，窄樹突野占25.40％(n=16)，中樹突野占44.44％(n=28)，寬樹突野占30.16％(n=19)。對(duì)細(xì)胞的分型統(tǒng)計(jì)測(cè)得，位于SGC淺層部位，其樹突末端投射到中腦頂蓋的F層的1型細(xì)胞胞體的面積平均值為（262.2±72.4）μm2(n=22)，位于SGC淺層樹突末端投射到中腦頂蓋D層的2型細(xì)胞胞體的面積平均值為（321

6、.7±157.9）μm2(n=19)，位于SGC的深層，樹突主要斜向投射到中腦頂蓋H～J層的3型細(xì)胞胞體的面積平均值為(408.20±180.13)μm2(n=13)，位于SGC細(xì)胞的深層，其樹突野與頂蓋表面平行，水平投射在SGC神經(jīng)元內(nèi)的4型細(xì)胞胞體的面積平均值為(363.52±118.23)μm2(n=9)。對(duì)SGC神經(jīng)元的樹突野運(yùn)用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，測(cè)得1型細(xì)胞的樹突野的平均值為（277.79±133.6）μm(n=20)

7、，2型細(xì)胞樹突野的平均值為（236.07±113.2）μm(n=21)，3型細(xì)胞樹突野的平均值為(195.49±90.3)μm(n=14)，4型細(xì)胞樹突野的平均值為(148.86±110.2)μm(n=8)。
　　本試驗(yàn)采用細(xì)胞內(nèi)注射熒光黃對(duì)雞的視頂蓋神經(jīng)元進(jìn)行研究的方法可觀察到完整的投射向圓核的SGC神經(jīng)元胞體和突起。與其它標(biāo)記法相比，熒光黃細(xì)胞內(nèi)注射法可以標(biāo)記單一神經(jīng)元，且對(duì)所標(biāo)記的投射部位非常準(zhǔn)確，不會(huì)被周圍細(xì)胞的纖維干擾，