雜交油菜品種純度聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定方法的研究.pdf

1、本研究在前人關(guān)于作物種子純度鑒定研究的基礎(chǔ)上,研究了酯酶同工酶電泳、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE等電泳方法對(duì)雜交油菜種子純度鑒定的影響,并進(jìn)行了品種真實(shí)性和種子純度的驗(yàn)證性試驗(yàn)和掃描電鏡分析。主要研究結(jié)果如下： 1.選用不同油菜品種、油菜雜交種及其親本,培育不同發(fā)育時(shí)期幼苗(萌發(fā)0d,1d,3d,5d,7d),提取酯酶同工酶,進(jìn)行電泳。由電泳圖譜觀察發(fā)現(xiàn),

2、3d.5d芽齡的幼苗是利用酯酶同工酶電泳鑒定品種真實(shí)性和種子純度的最適宜時(shí)期。 2.研究了堿性電泳緩沖系統(tǒng)在雜交油菜品種真實(shí)性及種子純度鑒定中的應(yīng)用。分析了油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四類蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜,探索適合雜交油菜種品種鑒定的蛋白質(zhì)電泳系統(tǒng)：分析了分離膠濃度,濃縮膠濃度,離子強(qiáng)度,電極緩沖液濃度等對(duì)電泳效果的影響；經(jīng)多次試驗(yàn)分析,本試驗(yàn)選擇分離膠濃度10％,濃縮膠濃度3％,堿性電極緩沖液pH8.

3、3的組合進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳,此組合電泳圖譜較為清晰,效果較好。應(yīng)用上述方法對(duì)8個(gè)雜交油菜組合的干種子進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,四類主要蛋白質(zhì)在品種間均存在不同程度的譜帶差異,均可較好區(qū)分不同的雜交油菜品種,其中堿性體系谷蛋白的多態(tài)性較強(qiáng),圖譜清晰度較高,鑒定雜交油菜品種真實(shí)性和種子純度的效果更好。 3.利用醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE三種酸性電泳緩沖系統(tǒng),油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四類蛋白電泳對(duì)雜交油菜品種

4、真實(shí)性和種子純度進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,多數(shù)酸性電泳緩沖系統(tǒng)的酶譜效果較差,但在醋酸-PAGE緩沖系統(tǒng)條件下,清蛋白多態(tài)性較強(qiáng),鑒定雜交油菜品種的效果相對(duì)較好。酸性電泳緩沖系統(tǒng)雖然比較穩(wěn)定,但其酶譜效果明顯不如堿性體系的蛋白質(zhì)電泳。 4.為了探討室內(nèi)谷蛋白SDS-PAGE電泳檢測(cè)與田間純度的關(guān)系,選擇8個(gè)雜交油菜品種,通過(guò)田間種植試驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)室雜交種種子純度谷蛋白的SDS-PAGE電泳檢測(cè)驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果表明,田檢純度