雜交油菜品種純度聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定方法的研究.pdf

1、本研究在前人關于作物種子純度鑒定研究的基礎上,研究了酯酶同工酶電泳、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE等電泳方法對雜交油菜種子純度鑒定的影響,并進行了品種真實性和種子純度的驗證性試驗和掃描電鏡分析。主要研究結果如下： 1.選用不同油菜品種、油菜雜交種及其親本,培育不同發(fā)育時期幼苗(萌發(fā)0d,1d,3d,5d,7d),提取酯酶同工酶,進行電泳。由電泳圖譜觀察發(fā)現(xiàn),

2、3d.5d芽齡的幼苗是利用酯酶同工酶電泳鑒定品種真實性和種子純度的最適宜時期。 2.研究了堿性電泳緩沖系統(tǒng)在雜交油菜品種真實性及種子純度鑒定中的應用。分析了油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四類蛋白質的SDS-PAGE電泳圖譜,探索適合雜交油菜種品種鑒定的蛋白質電泳系統(tǒng)：分析了分離膠濃度,濃縮膠濃度,離子強度,電極緩沖液濃度等對電泳效果的影響；經(jīng)多次試驗分析,本試驗選擇分離膠濃度10％,濃縮膠濃度3％,堿性電極緩沖液pH8.

3、3的組合進行蛋白質電泳,此組合電泳圖譜較為清晰,效果較好。應用上述方法對8個雜交油菜組合的干種子進行了分析。結果表明,四類主要蛋白質在品種間均存在不同程度的譜帶差異,均可較好區(qū)分不同的雜交油菜品種,其中堿性體系谷蛋白的多態(tài)性較強,圖譜清晰度較高,鑒定雜交油菜品種真實性和種子純度的效果更好。 3.利用醋酸-PAGE、乳酸-PAGE、甲酸-PAGE三種酸性電泳緩沖系統(tǒng),油菜清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白等四類蛋白電泳對雜交油菜品種

4、真實性和種子純度進行鑒定。結果表明,多數(shù)酸性電泳緩沖系統(tǒng)的酶譜效果較差,但在醋酸-PAGE緩沖系統(tǒng)條件下,清蛋白多態(tài)性較強,鑒定雜交油菜品種的效果相對較好。酸性電泳緩沖系統(tǒng)雖然比較穩(wěn)定,但其酶譜效果明顯不如堿性體系的蛋白質電泳。 4.為了探討室內(nèi)谷蛋白SDS-PAGE電泳檢測與田間純度的關系,選擇8個雜交油菜品種,通過田間種植試驗與實驗室雜交種種子純度谷蛋白的SDS-PAGE電泳檢測驗證性試驗結果進行相關分析。結果表明,田檢純度