湖南省白檀種質(zhì)資源遺傳多樣性及果實脂肪酸研究.pdf

1、白檀(Symplocos paniculata(Thunb.)Miq.)作為新型木本油料植物，其果實含油率高達(dá)36.6％，全果利用率接近100％。其籽油內(nèi)含人體必需的兩種不飽和脂肪酸，即油酸和亞油酸，含量高達(dá)70％以上，而硬脂酸含量低，是較為理想、有益健康的食用植物油，也是制備生物柴油的理想原料。白檀適生能力強，可垂直分布于海拔80-2500m山地及溝谷中，又可生長于貧瘠的荒山坡地以及廢棄礦區(qū)，是退化環(huán)境修復(fù)理想的先鋒樹種。由此可見，白

2、檀資源的開發(fā)與利用具有良好的生態(tài)，經(jīng)濟和社會效益。然而，白檀至今仍處于野生狀態(tài)，相關(guān)研究報道甚少，為充分開發(fā)利用這種野生資源，本文對湖南分布比較集中的6個區(qū)域進(jìn)行了白檀資源調(diào)查，利用形態(tài)學(xué)標(biāo)記和ISSR分子標(biāo)記相結(jié)合分析白檀資源的遺傳多樣性，開展白檀體細(xì)胞胚繁殖技術(shù)研究，觀測研究白檀果實發(fā)育及脂肪酸積累規(guī)律，為白檀種質(zhì)資源遺傳多樣性評價系統(tǒng)構(gòu)建、挖掘白檀優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源、建立優(yōu)質(zhì)種質(zhì)保存體系和綜合利用開發(fā)體系奠定基礎(chǔ)，其主要研究結(jié)果如下:<

3、br>　　1、完善和規(guī)范了白檀種質(zhì)資源主要表型性狀觀測記錄方法及性狀評價標(biāo)準(zhǔn)，并篩選出白檀資源集中且具有代表性的6個白檀居群。
　　2、白檀表型性狀遺傳多樣性豐富，居群間和居群內(nèi)均存在不同程度的變異。不同居群間樹高與枝下高、鮮果千粒重、種子千粒重、果穗長等表型性狀差異極顯著，具有較強的遺傳分化;葉柄長、果形指數(shù)及果實緊密度等性狀間遺傳分化較小;居群內(nèi)，除道縣白檀單株表型性狀遺傳分化程度較低外，其余居群內(nèi)均存在不同程度的差異性。

4、r>　　3、白檀ISSR-PCR最優(yōu)反應(yīng)體系為:總體積20μL，DNA模板80ng（1.6μL），Mg2+3mmol/L(2.4μL),dNTPs0.2mmol/L(1.6μL)，引物0.5umol/L(1μL),Taq DNA聚合酶1.25U（0.5μL），10×PCR Buffer(Mg2+ free)2μL，滅菌的ddH2O10.9μL。反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性4min;94℃變性30s，54℃退火45s，72℃延伸90s，30個

5、循環(huán);72℃延伸7min，4℃下保存。
　　4、利用5條多態(tài)性較高的ISSR引物對6個不同居群的68份白檀樣品進(jìn)行DNA多樣性分析，通過PCR擴增檢測到74個擴增位點，電泳條帶分布在200-2500bp之間，其中多態(tài)位點73個，多態(tài)性比率高達(dá)98.65％。居群內(nèi)期望雜合度分布在0.10949～0.24805之間，最高的是大圍山B區(qū)(0.24805)，最低的是衡山(0.10949)，表明大圍山居群B群內(nèi)遺傳多樣性豐富，而衡山居群群體

6、內(nèi)遺傳同一性較高。
　　5、居群間DNA多樣性聚類分析，6個居群分為三大類，第一大類為大圍山A區(qū)、大圍山B區(qū)和衡山居群，第二大類為岳陽和道縣居群，龍山居群單獨成第三大類，整體上是地理上分布近的天然居群容易聚為一類，這與表型性狀的聚類分析結(jié)果基本一致;對來自不同居群的68個樣株聚類，被聚為11個類群，其中，來自龍山居群的單株被分成6個小類群，即居群內(nèi)遺傳分化豐富。
　　6、以白檀種子未成熟胚為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，構(gòu)建了體細(xì)胞胚

7、快繁體系。以改良MS+0.25mg/L6-BA+0.15mg/LNAA為分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基，胚性愈傷組織分化成體細(xì)胞胚及體細(xì)胞胚的增殖率分別高達(dá)71.99％和76.56％。將成熟體細(xì)胞胚在1/2改良MS+1.5％的蔗糖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，成苗率可達(dá)85％。
　　7、來自不同居群的白檀果實發(fā)育及油脂積累規(guī)律基本一致，但居群間脂肪酸含量差異顯著。果實形態(tài)發(fā)育可劃分為3個時期:快速生長期、緩慢生長期和果皮顏色變化期。油脂快速積累開始于果實緩慢生長

8、期，果皮顏色變化期果實油脂總含量趨于穩(wěn)定，飽和與不飽和脂肪酸的相對含量發(fā)生變化。白檀果實平均含油率為34.32％，不同居群間存在差異，大圍山A區(qū)含油率最高，可達(dá)36.6％，大圍山B區(qū)含油率最低，僅為31.32％。
　　8、白檀果實油脂以油體和特化油細(xì)胞的形式貯存于全果中，以中果皮、胚乳和胚三個部位分布最豐富，其脂肪酸主要組成成分為油酸、亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸及硬脂酸，其中油酸和亞油酸含量與其果實生長發(fā)育階段日均最高氣溫、年日照時數(shù)