TLR4-NF-κB信號通路介導oxLDL上調人臍靜脈內(nèi)皮細胞LOX-1、MCP-1、VCAM-1的表達.pdf

1、研究背景：白細胞在內(nèi)皮下的募集是動脈粥樣硬化一個很重要的特征，而oxLDL正是這一募集過程的重要誘因。oxLDL可刺激內(nèi)皮細胞分泌粘附分子、選擇素和趨化蛋白等炎性因子，進而促使白細胞對內(nèi)皮細胞的粘附，遷移至內(nèi)皮下。TLR4作為oxLDL在內(nèi)皮細胞上非常重要的受體可能參與了該過程，但其作用機制尚不完全明了，有待進一步的研究。
　　第一部分 oxLDL對HUVECs表達TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影響
　　目

2、的：觀察不同濃度oxLDL對HUVECs表達TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影響。
　　方法：待HUVECs細胞融合度達到80％后，更換新鮮無血清1640培養(yǎng)基使細胞同步在G0期，12h后再換新鮮培養(yǎng)基并加入不同濃度的oxLDL（0、20、40、60、80μg/mL）孵育HUVECs，24h后用RT-PCR檢測不同濃度oxLDL對HUVECs表達TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1 mRNA的影響，48h

3、后用Western blot檢測蛋白表達影響。
　　結果：oxLDL濃度依賴性地上調人臍靜脈內(nèi)皮細胞TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA以及蛋白的表達。oxLDL在20μg/mL時即有顯著作用（P<0.05）,且隨著oxLDL濃度的升高，TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1 mRNA和蛋白表達水平均呈濃度依賴性上升趨勢；與0μg/mL相比，80μg/mL組TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1

4、mRNA和蛋白的表達上調最為顯著（P<0.001）。
　　第二部分TLR4/NF-κB信號通路在oxLDL上調HUVECs表達LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及機制研究
　　目的：檢測TLR4和NF-κB在oxLDL上調HUVECs表達LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及調節(jié)機制。
　　方法：用siTLR4轉染HUVECs，Western blot檢測LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表達及

5、NF-κB（P50）核易位；NF-κB特異性抑制劑PDTC處理HUVECs48h，Western blot檢測TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1蛋白表達。
　　結果：siTLR4顯著降低了LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表達且降低了NF-κB（P50）的核易位現(xiàn)象（P<0.001），PDTC顯著抑制了TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的蛋白表達（P<0.001）。
　　結論：oxLDL濃度依賴