TLR4-NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)oxLDL上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞LOX-1、MCP-1、VCAM-1的表達(dá).pdf

1、研究背景：白細(xì)胞在內(nèi)皮下的募集是動(dòng)脈粥樣硬化一個(gè)很重要的特征，而oxLDL正是這一募集過(guò)程的重要誘因。oxLDL可刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌粘附分子、選擇素和趨化蛋白等炎性因子，進(jìn)而促使白細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，遷移至內(nèi)皮下。TLR4作為oxLDL在內(nèi)皮細(xì)胞上非常重要的受體可能參與了該過(guò)程，但其作用機(jī)制尚不完全明了，有待進(jìn)一步的研究。
　　第一部分 oxLDL對(duì)HUVECs表達(dá)TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影響
　　目

2、的：觀察不同濃度oxLDL對(duì)HUVECs表達(dá)TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的影響。
　　方法：待HUVECs細(xì)胞融合度達(dá)到80％后，更換新鮮無(wú)血清1640培養(yǎng)基使細(xì)胞同步在G0期，12h后再換新鮮培養(yǎng)基并加入不同濃度的oxLDL（0、20、40、60、80μg/mL）孵育HUVECs，24h后用RT-PCR檢測(cè)不同濃度oxLDL對(duì)HUVECs表達(dá)TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1 mRNA的影響，48h

3、后用Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)影響。
　　結(jié)果：oxLDL濃度依賴性地上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1mRNA以及蛋白的表達(dá)。oxLDL在20μg/mL時(shí)即有顯著作用（P<0.05）,且隨著oxLDL濃度的升高，TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均呈濃度依賴性上升趨勢(shì)；與0μg/mL相比，80μg/mL組TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1

4、mRNA和蛋白的表達(dá)上調(diào)最為顯著（P<0.001）。
　　第二部分TLR4/NF-κB信號(hào)通路在oxLDL上調(diào)HUVECs表達(dá)LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及機(jī)制研究
　　目的：檢測(cè)TLR4和NF-κB在oxLDL上調(diào)HUVECs表達(dá)LOX-1、MCP-1、VCAM-1中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：用siTLR4轉(zhuǎn)染HUVECs，Western blot檢測(cè)LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表達(dá)及

5、NF-κB（P50）核易位；NF-κB特異性抑制劑PDTC處理HUVECs48h，Western blot檢測(cè)TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：siTLR4顯著降低了LOX-1、MCP-1、VCAM-1蛋白表達(dá)且降低了NF-κB（P50）的核易位現(xiàn)象（P<0.001），PDTC顯著抑制了TLR4、LOX-1、MCP-1及VCAM-1的蛋白表達(dá)（P<0.001）。
　　結(jié)論：oxLDL濃度依賴