氨氯地平經(jīng)NF-κB通路下調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細胞PDGF-B的表達.pdf

1、一、PDGF-B在ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中表達的改變
　　目的:通過氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用人臍靜脈內(nèi)皮細胞，觀察隨著ox-LDL濃度和時間的變化，PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達改變。
　　方法:實驗采用不同濃度（0，25，50，100 mg/L）ox-LDL與HUVEC-12內(nèi)皮細胞共同孵育24h，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫印跡(Western blot)分別檢測 PDGF-B

2、 mRNA和蛋白質(zhì)的表達改變；然后選擇50 mg/L ox-LDL與HUVEC-12細胞孵育不同時間（0，3，6，12，24h）后，同樣用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達改變；篩選出ox-LDL對PDGF-B表達影響適宜的處理濃度與時間。
　　結(jié)果:隨ox-LDL濃度增加，PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達趨勢一致，先逐漸上調(diào)，當(dāng)濃度為50 mg/L時，表達水平達峰值，但當(dāng)濃度為

3、100 mg/L時，表達下降。結(jié)合文獻和我們的實驗結(jié)果，以下選擇ox-LDL的處理濃度為50 mg/L。隨著ox-LDL處理時間的延長，PDGF-BmRNA和蛋白質(zhì)的表達逐漸增加，在24h時，達最大值。因此在后續(xù)實驗中選擇50mg/L ox-LDL刺激HUVEC-12內(nèi)皮細胞24小時，作為促進PDGF-B表達明顯上調(diào)的最適濃度與時間。
　　結(jié)論: Ox-LDL可影響HUVEC-12內(nèi)皮細胞中PDGF-B的表達
　　二、氨氯地

4、平對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
　　目的:觀察不同濃度（0，0.1，1.0，10.0μM）氨氯地平對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達改變。
　　方法:在第一部分實驗基礎(chǔ)上，我們選擇ox-LDL的處理濃度與時間分別為50 mg/L和24小時，實驗分為5組：對照組、ox-LDL組、（0.1，1.0，10.0μM）氨氯地平預(yù)先處理細胞30min后加入50

5、mg/L ox-LDL共同孵育24小時組。用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達及NF-κB的蛋白表達改變；篩選出氨氯地平影響PDGF-B及NF-κB表達的適宜濃度。
　　結(jié)果:隨著氨氯地平濃度增加，細胞PDGF-B mRNA和蛋白質(zhì)的表達及NF-κB的蛋白表達均逐漸減少，并呈現(xiàn)濃度依賴性，當(dāng)濃度為10.0μM時作用更明顯。
　　結(jié)論:氨氯地平可下調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC-

6、12內(nèi)皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達。
　　三、氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
　　目的:觀察氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響，以分析氨氯地平通過NF-κB通路對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞PDGF-B表達的作用。<

7、br>　　方法:在第二部分實驗基礎(chǔ)上，選擇10.0μM氨氯地平和20μM PDTC分別預(yù)孵育HUVEC-12內(nèi)皮細胞30min，再與ox-LDL共同孵育24h，共分為六組：對照組、ox-LDL組、PDTC+ox-LDL組、氨氯地平+ox-LDL組和PDTC、氨氯地平單獨處理組， RT-PCR和ELISA分別檢測細胞PDGF-B的mRNA和蛋白表達， Western blot與免疫細胞化學(xué)檢測細胞NF-κBp65的蛋白表達。
　　結(jié)