生物酶法生產生物柴油及其相關研究.pdf

1、目的：分離、篩選出產具有較高轉酯活性脂肪酶的菌株,提取粗脂肪酶,用于催化生物柴油；通過PCR擴增的手段來獲得脂肪酶基因。 方法：以橄欖油為唯一碳源來富集培養(yǎng)、以RhodamineB為指示劑的平板進行初篩、搖瓶復篩來得到產脂肪酶菌株；利用滴定法、平板擴散法檢測酶活,最終篩選出脂肪酶活力高的菌株：借助于正交實驗得出其菌株的最佳產酶條件；利用丙酮法和(NH4)2SO4沉降法得到粗酶,催化以叔丁醇為溶劑、棉籽油與甲醇反應生產生物柴油；通

2、過PCR擴增手段獲得脂肪酶基因,轉化DH5a菌,測序鑒定結果。 結果：1.進行了脂肪酶產生菌的大量篩選工作。經以橄欖油為唯一碳源、RhodamineB為指示劑的平板初篩實驗,搖瓶復篩及酶活測定,最終篩選出一株所產生的脂肪酶可以催化轉酯反應生產生物柴油的細菌B2。通過對B2進行形態(tài)學觀察及16S rDNA部分序列的系統(tǒng)進化發(fā)育分析,初步確定其屬于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)；2.對篩選到的B2菌株液體搖瓶產脂肪酶的條件進

3、行了優(yōu)化。確定其最適產酶條件為：蔗糖1.0g,黃豆粉1.0g,蛋白胨0.5g,K2rtPO40.1g,MgSO4·7H2O 0.05g,水100mL,pH6.5;培養(yǎng)溫度為30,搖床轉速225r/min,搖瓶裝樣量為250mL三角瓶裝樣30mL,最佳培養(yǎng)時間48h；3.優(yōu)化產酶條件后脂肪酶活力提高,由最初的10.12U/mL增長到22.33U/mL增幅120.65％。通過丙酮法、(NH4)2SO4沉降法獲得脂肪酶,在叔丁醇作溶劑體系中,