結(jié)核分枝桿菌利福平依賴株的遺傳穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究.pdf

1、結(jié)核菌藥物依賴現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，給結(jié)核病的防治又提出新的挑戰(zhàn)。結(jié)核菌藥物依賴，則意味著臨床繼續(xù)使用該藥不但治療無效，而且在一定條件下可能促進(jìn)病原菌生長(zhǎng)繁殖，使病情加重。因此對(duì)結(jié)核菌藥物依賴現(xiàn)象進(jìn)行研究已刻不容緩。 目前藥物依賴現(xiàn)象研究的瓶頸在于這種依賴性在體外不能穩(wěn)定傳代，因此本研究挑選依賴?yán)Ｆ浇Y(jié)核菌進(jìn)行體外連續(xù)傳代實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明其藥物依賴性可穩(wěn)定遺傳約30代。將經(jīng)傳代依賴性完全消失的結(jié)核菌懸液尾靜脈注射感染小鼠，以不同頻率給予利福

2、平灌胃，觀察到部分結(jié)核菌恢復(fù)依賴性。 依賴菌所致肺結(jié)核以病情重、耐多藥、化療效果差和預(yù)后不良為主要臨床特征，遠(yuǎn)比一般耐藥病例危害大。已知結(jié)核分枝桿菌利福平依賴株和耐受株的rpoB基因突變高發(fā)位點(diǎn)基本相同，DNA指紋類型及分布亦無明顯特殊性，表明前者的變異主要為表型變異。因此，依賴現(xiàn)象的獨(dú)特表現(xiàn)可能僅源于基因表達(dá)差異。本研究從蛋白水平著手，優(yōu)化了結(jié)核分枝桿菌的蛋白質(zhì)組分析中的二維凝膠電泳技術(shù)，并用于分析利福平依賴株和耐受株總蛋白質(zhì)

3、的差異，獲得了利福平依賴株和耐受株總蛋白質(zhì)表達(dá)譜，鑒定8個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，獲得7種蛋白質(zhì)：3-氧?；鵞?；d體蛋白]合酶(3-oxoacyl-ACP synthase)、抗原85B A鏈(chain A，Ag85B)、烯醇基輔酶A水解酶(ECH)、跨膜絲/蘇氨酸蛋白激酶D(STPK D)、假想轉(zhuǎn)移酶(putative transferase)、3-酮酸-輔酶A轉(zhuǎn)移酶β亞單位(βsubunit，SCOB)、熱休克蛋白HSPX，初步