NOGO-B在動(dòng)脈粥樣硬化病變中差異表達(dá)的研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是很多心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，其發(fā)生的危險(xiǎn)因素主要為高血脂、高血壓、吸煙等，導(dǎo)致斑塊形成和管壁狹窄，妨礙相應(yīng)組織器官的血流供應(yīng)。AS的發(fā)病機(jī)制尚不明確，R.Ross提出了著名的炎癥損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)，認(rèn)為AS的發(fā)病過(guò)程是一種慢性的炎癥反應(yīng)過(guò)程。 AS早期常見(jiàn)的表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞損傷或剝脫，內(nèi)膜通透性增加，少量血漿脂質(zhì)向內(nèi)皮下入侵，中膜平滑肌細(xì)胞增生并進(jìn)入內(nèi)膜形成泡沫樣細(xì)胞，隨后由于脂

2、質(zhì)入侵增多發(fā)展成為AS斑塊。因此內(nèi)皮細(xì)胞損傷是AS斑塊形成的始動(dòng)因素。在AS早期的病理改變過(guò)程中，沉積在AS斑塊上的脂質(zhì)來(lái)源于血漿中氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。血管壁內(nèi)和AS損傷處的所有主要細(xì)胞都能氧化LDL，產(chǎn)生氧化型LDL。但AS早期階段內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)LDL的輕度氧化可能是至關(guān)重要的。 NOGO是一種跨膜的功能蛋白，主要有3個(gè)亞型(NOGO-A、B、C)。近年來(lái)大量的研究集中于NOGO-A的生物學(xué)作用、受體以及對(duì)神經(jīng)軸突

3、的生長(zhǎng)和再生的抑制作用。NOGO-B存在組織較廣泛，特別是在血管系統(tǒng)中高表達(dá)，已有報(bào)道NOGO-B抑制血管損傷后再生。本研究采用ox-LDL的主要成分溶血磷脂膽堿(lysophosphatidylcholine，LPC)刺激小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞模擬AS早期病理改變，檢測(cè)離體狀態(tài)下NOGO-B在mRNA和蛋白水平表達(dá)的改變。并在成功建立AS的病理模型上，深入研究NOGO-B在大鼠AS過(guò)程中斑塊區(qū)與非斑塊區(qū)mRNA和蛋白水平表達(dá)的差異。

4、 AS廣泛存在于高血壓、糖尿病、高血脂等病人血管系統(tǒng)，危害極大。本研究選用主動(dòng)脈夾層動(dòng)脈瘤病人的主動(dòng)脈組織，進(jìn)一步探討NOGO一B在AS斑塊中的表達(dá)，以期尋找AS病變防治的新靶點(diǎn)。 本課題的研究進(jìn)展主要概括為以下3個(gè)方面： 一.采用LPC刺激H5V細(xì)胞系檢測(cè)NOGO-B表達(dá) 1.采用WesternBlotting方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)正常狀態(tài)下H5V內(nèi)皮細(xì)胞中在蛋白水平只存在NOGO-B1的表達(dá)而無(wú)NOGO-B2表達(dá)

5、，但是二者在mRNA水平均有表達(dá)。 2.當(dāng)LPC刺激H5V細(xì)胞后NOGO-B1的蛋白表達(dá)降低，而mRNA水平表達(dá)沒(méi)有發(fā)生改變，除了20uM的LPC刺激H5V細(xì)胞24h時(shí)段引起NOGO-B1mRNA表達(dá)下降50％。 3.LPC刺激H5V細(xì)胞引起NOGO-B2在蛋白和mRNA水平的表達(dá)均出現(xiàn)一過(guò)性升高。 二.建立AS大鼠模型檢測(cè)NOGO-B在體表達(dá) 1.采用NothernBlotting方法檢測(cè)NOGO-B1

6、在動(dòng)脈AS區(qū)表達(dá)下降，NOGO-B2無(wú)顯著變化。 2.采用免疫組化方法檢測(cè)NOGO-B在大鼠主動(dòng)脈AS區(qū)表達(dá)下降，以內(nèi)膜區(qū)尤為顯著。 三.采集3例AS導(dǎo)致主動(dòng)脈夾層病人組織檢測(cè)NOGO-B表達(dá)差異 1.采用WesternBlotting方法檢測(cè)NOGO-B在主動(dòng)脈內(nèi)膜層表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)AS區(qū)降低。 2.采用免疫組化方法檢測(cè)進(jìn)一步驗(yàn)證在人主動(dòng)脈AS區(qū)NOGO-B表達(dá)下降。 結(jié)論：NOGO-B參與動(dòng)脈粥