MicroRNAs在動(dòng)脈粥樣硬化血管中的異常表達(dá).pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展與心腦血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)的microRNA-221/222能通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子ETS-1的表達(dá)進(jìn)而減輕AngII誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，而炎癥的病理過(guò)程貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化全過(guò)程，因此本課題我們?cè)隗w分析了microRNAs在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)及功能。采用硅膠套管植入法制作 ApoE-/-小鼠頸總動(dòng)脈斑塊快速形成模型，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)對(duì)心血管疾病相關(guān)的 m

2、icroRNA-125b、microRNA-221、microRNA-156、microRNA-23a、microRNA-22及其靶基因在對(duì)照和模型小鼠頸總動(dòng)脈組織中的差異表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，以期能夠進(jìn)一步闡明MicroRNA在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增殖和炎癥反應(yīng)中的作用。
　　方法：⑴動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的建立：在10-12周齡小鼠頸部，利用硅膠套管內(nèi)徑小于血管內(nèi)徑的方式，通過(guò)手術(shù)方式，在其頸總動(dòng)脈固定一5mm長(zhǎng)的硅膠套管，縮窄頸總動(dòng)脈。

3、小鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)16周后，觀察頸動(dòng)脈血管變化，并通過(guò)蘇木素-伊紅染色、油紅O染色進(jìn)行組織學(xué)分析，檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生情況。⑵病理組織切片：蘇木素-伊紅染色法、油紅O染色法制作病理組織切片，對(duì)比血管內(nèi)壁病理學(xué)差異改變。⑶基因芯片技術(shù)檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化中的microRNAs表達(dá)。⑷熒光定量PCR技術(shù)：實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血管斑塊中microRNAs的表達(dá)。
　　結(jié)果：ApoE-/-小鼠頸總動(dòng)脈縮窄手術(shù)后，高脂飲食喂養(yǎng)16周后，麻醉

4、，切開(kāi)頸部皮膚，顯露頸總動(dòng)脈，于頸總動(dòng)脈套管處可見(jiàn)呈黃色的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊遍及血管腔內(nèi)。血管組織固定、脫水后，經(jīng)油紅O染色，可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞下有大量大小不等的泡沫細(xì)胞，炎性細(xì)胞，纖維肉芽組織等，血管管腔內(nèi)可伴有出血、脂質(zhì)沉積。通過(guò)基因芯片對(duì) microRNAs表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，顯示microRNA-23，microRNA-142-5p等在動(dòng)脈粥樣硬化的 Apo-E-/-小鼠血管組織含量明顯高于普通C57小鼠的血管組織含量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR

5、對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中microRNAs進(jìn)行表達(dá)檢測(cè)，顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的血管組織中，其中MicroRNA23在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物血管組織中的表達(dá)量（2.74±0.37），明顯高于在對(duì)照組中（1±0.22），其中實(shí)驗(yàn)組P﹤0.05，對(duì)照組P﹤0.01，n=6，表明MicroRNA23表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，且microRNA-23a的表達(dá)量是對(duì)照組的3倍。與基因芯片結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：本工作發(fā)現(xiàn)在小鼠動(dòng)脈粥樣模型中，多種microRNAs