動脈粥樣硬化microRNA表達譜的研究.pdf

1、目的：
　　篩選出動脈粥樣硬化患者與正常對照者之間差異表達microRNA(miRNA),為了解miRNA在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中的作用及課題組進一步研究miRNA靶向調節(jié)ⅡA型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-ⅡA)表達在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中的作用奠定基礎。
　　方法：
　　1、收集廈門大學附屬第一醫(yī)院心血管內科門診與病房確診的冠狀動脈粥樣硬化患者3例，健康對照者3例。所有病例均在胸痛等癥狀發(fā)作后48小時內采集外周血液

2、，分離血清。
　　2、抽提樣本總RNA，用標記酶將Hy3TM或Hy5TM熒光集團標記質檢合格的RNA,采用Exiqon公司的microRNA芯片進行檢測，篩選出差異表達的miRNAs。
　　3、為了進一步驗證microRNA芯片結果的可靠性，挑選出11個具有代表性的差異表達miRNAs分子：過表達的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、h

3、sa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表達的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p。采用實時定量PCR方法進行驗證，用hsa-miR-423-5p作為內參，所得數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCT方法進行分析。
　　結果：
　　1、用microRNA芯片篩選出差異表達顯著改變(上調或下調2倍以上)的miRNAs分子232個，其中過表達2倍以上的的mi

4、RNAs分子134個，過表達5倍以上的miRNAs分子15個，過表達10倍以上的miRNAs分子1個，為hsa-miR-548ac；低表達2倍以上的miRNAs分子98個，低表達5倍以上的miRNAs分子20個，低表達10倍以上的miRNAs分子3個為hsa-miR-3155a、hsa-miR-3158-3p、hsa-miR-371b-5p?？傮w上動脈粥樣硬化患者與正常對照者之間差異性表達顯著。
　　2、我們挑選出的11個具有代表

5、性的差異表達miRNAs分子，過表達的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、hsa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表達的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p，經(jīng)實時定量PCR驗證，結果與芯片結果基本吻合。
　　結論：
　　1、動脈粥樣硬化患者與

6、正常對照者之間miRNAs差異表達顯著，建立了動脈粥樣硬化miRNAs的完整表達譜。為探討miRNA在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中的作用提供有效和準確的分子學依據(jù)。
　　2、通過運用microRNA芯片篩選出動脈粥樣硬化差異表達miRNAs，并經(jīng)實時定量PCR驗證，結果與microRNA芯片表達趨勢一致，說明microRNA芯片結果真實可靠，可用于后續(xù)研究。
　　3、為下一步研究miRNA靶向調節(jié)sPLA2-ⅡA表達在動脈粥樣硬化