小鼠胚胎冷凍和重復(fù)冷凍的研究.pdf

1、本實驗主要應(yīng)用程序冷凍和玻璃化冷凍兩種方法對小鼠桑椹胚和囊胚進行冷凍，探討不同濃度的乙二醇(EG)和EFS玻璃化液對胚胎發(fā)育的影響，并研究胚胎經(jīng)重復(fù)冷凍的可行性及解凍后的發(fā)育率。 實驗結(jié)果表明： 1.經(jīng)抗凍保護劑的玻璃化與脫玻璃化試驗，EFS20、EFS30和EFS40可以做為小鼠胚胎玻璃化冷凍液。 2.經(jīng)抗凍保護劑的毒性試驗表明，作為抗凍保護液基礎(chǔ)液的mPBS對胚胎體外發(fā)育無不良影響；低濃度的乙二醇(1.8mo

2、l/L～3.6mol/L)對胚胎幾乎無毒性，但高濃度的乙二醇(4.5mol/L)對胚胎有一定的毒性；在EFS20、EFS30和EFS40中短時間處理(0.5min)對胚胎幾乎無毒性，但隨著濃度的增加和處理時間的延長，毒性也越來越大。 3.經(jīng)不同濃度的乙二醇程序化冷凍和不同濃度的EFS系列玻璃化冷凍，桑椹胚冷凍解凍后的發(fā)育率分別為52.80/52.8％～92.5％和78.9％～91.5％，囊胚分別為38.6％82.8％和72.5％

3、～81.3％。其中以1.8mol/L,EG和EFS30對小鼠的胚胎冷凍效果最好(桑椹胚的發(fā)育率分別為92.5％和91.5％，囊胚的發(fā)育率分別為82.8％和81.3％)。 4.程序化冷凍和玻璃化冷凍兩種冷凍方法差異不顯著。 5.桑椹胚的抗凍性優(yōu)于囊胚。 6.經(jīng)1.8mo1/LEG首次程序化冷凍后再經(jīng)1.8mol/LEG程序化冷凍和EFS30玻璃化冷凍的發(fā)育率，桑椹胚分別為46.7％和53.8％，囊胚分別為26.4％