一種新的哺乳動物蛋白質(zhì)合成校正機(jī)制HDTD的初步研究.pdf

1、我們從聯(lián)合基因公司提供的人D-酪氨酰-tRNA脫酰酶(Human D-Tyr-tRNA Deacylase,HDTD)的cDNA序列入手,對HDTD基因序列進(jìn)行了分析和補(bǔ)充.HDTD cDNA全長1338bp,含有一個(gè)編碼209個(gè)氨基酸殘基的開放閱讀框架.序列第167-169位核苷酸為起始密碼子,旁側(cè)序列符合Kozat規(guī)律,3'末端具有典型的加尾信號.此cDNA序列在GenBank中的接收號為AF332356.通過BLAST比較發(fā)現(xiàn),此

2、cDNA編碼的蛋白與大腸桿菌、酵母、流感嗜血桿菌的D-Tyr-tRN<'Tyr>脫酰酶具有顯著同源性,與大腸桿菌DTD基因的一致性為39%,與酵母DTD基因的一致性為47%.進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),它具有與大腸桿菌、酵母、流感嗜血桿菌的D-Tyr-tRNA<'Tyr>脫酰酶相同的Tyr_Deacylase(DTD)結(jié)構(gòu)域.為了進(jìn)一步研究的需要,我們用原核表達(dá)的HDTD蛋白免疫家兔,制備了多克隆抗體,ELISA實(shí)驗(yàn)證明抗體滴度達(dá)到1:10萬以上.

3、用抗HDTD抗體對大鼠大腦皮層和海馬組織行免疫組織化學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)DTD蛋白在大腦皮層和海馬組織中廣泛表達(dá),主要定位于神經(jīng)元細(xì)胞核中,而膠質(zhì)細(xì)胞中幾乎沒有檢測到相應(yīng)的信號.本論文在對聯(lián)合基因公司提供的HDTD基因序列進(jìn)行信息學(xué)分析和補(bǔ)充的基礎(chǔ)上,從mRNA和蛋白水平對HDTD基因的表達(dá)譜進(jìn)行了分析,并且發(fā)現(xiàn)該基因表達(dá)受到其氨基酸底物的調(diào)節(jié),這種異常構(gòu)象的氨基酸對哺乳動物基因表達(dá)調(diào)控的影響尚屬首次報(bào)道.首次在體外檢測了哺乳動物D-酪氨酰tR