北細(xì)辛指紋圖譜研究以及血清藥物化學(xué)初步研究.pdf

1、目的：
　　采用氣流吹掃微注射器萃取法與氣相質(zhì)譜法聯(lián)用的方法（簡稱GP-MSE-GC-MS法）分析北細(xì)辛藥材中揮發(fā)性成分，并建立了北細(xì)辛的GP-MSE-GC-MS指紋圖譜，采用HPLC法研究北細(xì)辛藥材指紋圖譜，同時(shí)初步探討北細(xì)辛藥材的血清藥物化學(xué)，為北細(xì)辛藥材的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.北細(xì)辛的GP-MSE-GC-MS分析研究
　　分別采用氣流吹掃微注射器法（GP-MSE法）和水蒸氣蒸餾法（SD

2、法）提取北細(xì)辛全草中揮發(fā)性成分；GP-MSE法提取北細(xì)辛根莖、葉柄和葉中揮發(fā)性成分；GP-MSE法提取不同批次北細(xì)辛的揮發(fā)性成分，按照如下 GC-MS分析條件測定其揮發(fā)性成分，并進(jìn)行分析比較。
　　GC-MS分析條件：DB-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，載氣為He（純度≧99.99％），流速為1 mL/min。采取不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為2.0μL。采用程序升溫，進(jìn)樣口的溫度為280℃。起始溫度為45℃

3、，保持1 min，4℃/min升高至250℃，再以6℃/min升高至280℃，保持5 min。離子源為EI，溫度為200℃，其轟擊能量為70 eV。
　　2.北細(xì)辛的HPLC分析研究
　　選擇不同批次北細(xì)辛，按照如下HPLC分析條件分析，并進(jìn)行分析比較。
　　HPLC分析條件：KroasilC18分析柱（5μm,4.6 mm×250 mm）；柱溫為25℃；梯度洗脫流動(dòng)性，水（A）-甲醇（B）梯度洗脫(A%為72%→70

4、%→50%→45%→20%→20%，相應(yīng)時(shí)間周期為0→5 min→15 min→25min→45 min→60 min)；檢測波長為290 nm；體積流量1.0 mL/min,進(jìn)樣量為20μL。
　　3.北細(xì)辛的血清藥物化學(xué)研究
　　北細(xì)辛藥材提取溶劑為甲醇，SD大鼠給藥劑量5.4g/kg，2次/d連續(xù)5天灌胃，于最后1 d灌胃后1 h后眼球取血。采用HPLC方法分析血清中的成分。
　　結(jié)果：
　　1.北細(xì)辛的G

5、P-MSE-GC-MS分析研究
　　GP-MSE法得到的北細(xì)辛中揮發(fā)性成分的種類明顯比SD法多，SD法分離出38個(gè)峰，鑒定出30個(gè)峰，已鑒定出的揮發(fā)性成分占總揮發(fā)性成分的含量百分比為98.42％，而 GP-MSE法分離出96個(gè)峰，鑒定出46個(gè)成分，已鑒定出的揮發(fā)性成分占總揮發(fā)性成分的含量百分比為94.23％。
　　從北細(xì)辛藥材根莖、葉柄和葉中分別檢出了84、79和69個(gè)峰，分別鑒定出33、34和39種成分，已鑒定出的揮發(fā)性成

6、分占總揮發(fā)性成分的含量百分比分別為89.78%、81.99%和89.20%。其中根莖與葉柄有28個(gè)共有成分，根莖與葉有24個(gè)，而葉柄與葉存在26個(gè)共有成分，根莖、葉和葉柄3個(gè)部位共有成分有21個(gè)，相對百分含量在1%以上的為糖醛、糖醇、甲基丁香酚、十六烷酸和十五烷。根莖中百分含量最大的是甲基丁香酚（31%），再次是(2E,4Z,8Z,10E)-N-異丁基-2,4,8,10-十二四烯酰胺（11%）；葉柄中百分含量最大是亞油酸（15%），再次

7、是甲基丁香酚（12%）；葉中百分含量最大的是十六烷酸（10%），再次是2，3-二氫苯并呋喃（9%）。就主要成分而言，根莖和葉柄所含的主要成分較為相似，葉中則有很大不同。在葉中共鑒定出了10種特有成分分別為2，3-二氫苯并呋喃、葎草烯、綠花白千層醇、1，2-二甲基-1-環(huán)己烯、十五醛、六氫法呢基丙酮、葉綠醇、二十烷酸、二十七烷醇和二十四烷醇。2,5-二羥基苯乙酮僅僅存在于葉柄中，在根莖中鑒定出了2種特有成分為楓內(nèi)酯和α-布藜烯。
　

8、　運(yùn)用GP-MSE-GC-MS法對10批次不同來源的北細(xì)辛樣品進(jìn)行分析，共鑒定出37個(gè)共有峰，方法學(xué)考察的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，并建立了其指紋圖譜。通過主成分分析得出不同批次北細(xì)辛可以很好的聚為一類。
　　2.北細(xì)辛的HPLC研究
　　運(yùn)用HPLC法對10批不同產(chǎn)地的北細(xì)辛藥材樣品進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)有13個(gè)共有峰，方法學(xué)考察的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性較好，并建立了其指紋圖譜。
　　3.北細(xì)辛的血清藥物化學(xué)研究
　

9、　通過對10只大鼠血清化學(xué)成分HPLC圖譜分析并建立了北細(xì)辛血清藥物化學(xué)的HPLC指紋圖譜，檢測出6個(gè)共有峰，與原藥材、空白血清圖譜的比較分析，初步認(rèn)為有3個(gè)峰是以原型藥物形式進(jìn)入大鼠體內(nèi)的；3個(gè)峰可能是藥材中某種成分的代謝產(chǎn)物或是大鼠給藥后自身應(yīng)激而產(chǎn)生的物質(zhì)。
　　結(jié)論：
　　1． GP-MSE法比SD法更適合北細(xì)辛的揮發(fā)性成分的研究。
　　2．北細(xì)辛藥材不同部位的揮發(fā)性成分的種類和含量差異較大。
　　3．建