胃癌血清蛋白指紋圖譜診斷模型的研究.pdf

1、目的：現(xiàn)代研究表明，胃癌與100多種基因及其蛋白產(chǎn)物密切相關(guān)，特別是在胃癌發(fā)生、發(fā)展的不同階段伴隨著不同的基因改變，并進(jìn)而產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。單個基因、蛋白質(zhì)檢測所需的技術(shù)條件高、儀器昂貴、步驟繁瑣、耗時冗長，而且對于胃癌診斷不是敏感性不好就是特異性不高，不適用于大規(guī)模的篩查、臨床檢測和推廣應(yīng)用。蛋白質(zhì)組學(xué)研究從整體出發(fā)，通過分離和鑒定腫瘤發(fā)展過程中出現(xiàn)的差異蛋白質(zhì)，來揭示腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)化的規(guī)律，從而尋找不同腫瘤的血清蛋白表達(dá)類

2、型。本研究旨在利用表面增強激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜分析(surface-enhanced laser desorption-ionizatiOn time-of-flight massspectrometry，SELDI ToF-MS)探討、篩選胃癌發(fā)生發(fā)展過程中特異的血清蛋白變化，并進(jìn)而建立胃癌的血清蛋白指紋圖譜診斷模型，為胃癌的普查、預(yù)警、診治等提供新的診療方法，以提高胃癌的治療效果。 方法：選2006年9月至2007年4

3、月期間我科住院經(jīng)手術(shù)后病理證實的胃癌病人40例、住院和門診經(jīng)手術(shù)或胃鏡證實的胃潰瘍病人20例、正常人20例，分別抽血5ml，制備標(biāo)本，加入芯片，通過親合作用使蛋白質(zhì)結(jié)合到芯片的生物學(xué)位點上；選擇性清洗去掉非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和緩沖液中的雜質(zhì)，以消除干擾；室溫干燥后，加能量吸收分子(Energy Absorb M0lecule，EAM)到每個點上，使其與蛋白質(zhì)結(jié)成混合晶體，以促進(jìn)蛋白質(zhì)在飛行時間質(zhì)譜檢測中的解吸附和離子化；用激光解析電離的

4、方法將保留在芯片上的蛋白質(zhì)解離出來，不同的質(zhì)量電荷比(m/z)飛行時間不同，用芯片閱讀器讀取數(shù)據(jù)，并通過分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。選特異性和敏感性好的差異蛋白質(zhì)峰組成蛋白指紋圖譜，建立胃癌診斷模型。 結(jié)果：在40例胃癌患者中，查見4個或以上差異蛋白質(zhì)峰的1例，3個差異蛋白質(zhì)峰的9例，2個差異蛋白質(zhì)峰的16例，1個差異蛋白質(zhì)峰的11例，m/z分別為：5329Da、4095Da、5910Da、8691Da、3300Da，未發(fā)現(xiàn)有差異蛋

5、白質(zhì)峰的3例；20例胃良性病變患者中，僅2例發(fā)現(xiàn)3個差異蛋白質(zhì)峰值，m/z分別為3933Da、5910Da和4095Da；20例正常人中均未發(fā)現(xiàn)差異蛋白質(zhì)峰。經(jīng)檢驗具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。篩選m/z為4095Da、5910Da、8691Da的差異蛋白組成的蛋白指紋圖譜對胃癌的診斷靈敏度92.5％，特異度97.5％，陽性預(yù)測值為97.3％，陰性預(yù)測值為92.9％。 結(jié)論： 1．SELDI-TOF-MS應(yīng)用于胃癌差異