藥物代謝及藥物作用新靶點(diǎn)的研究.pdf

1、微粒體細(xì)胞色素P450酶是對化學(xué)致癌劑代謝的非常重要的一類酶，近期發(fā)現(xiàn)其于小鼠乳腺上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞中都有表達(dá)。7，12-二甲基苯并葸(7，12dimethylbenz(a) anthracene，簡稱DMBA)是一種乳腺化學(xué)致癌劑，本實(shí)驗(yàn)的研究目的是為了進(jìn)一步探討小鼠乳腺上皮細(xì)胞中的細(xì)胞色素P450酶對DMBA在乳腺中的生物激活及分布情況的作用。為此，我們建立了一種新的小鼠模型（命名為MEpi-Cpr-null小鼠），即通過組織特異性

2、敲除細(xì)胞色素P450還原酶(Cpr)的手段來實(shí)現(xiàn)抑制小鼠乳腺上皮細(xì)胞中P450酶活性的目的（P450還原酶是所有微粒體細(xì)胞色素P450酶實(shí)現(xiàn)其活性所依賴的一種氧化還原酶）。接受單一劑量腹腔注射50mg/kgDMBA后，與對照組野生型小鼠相比，MEpi-Cpr-null小鼠乳腺中DMBA水平及DMBA-DNA加合物水平都顯著升高。免疫組化結(jié)果進(jìn)一步揭示，DMBA處理后，相比于野生型小鼠，MEpi-Cpr-null小鼠乳腺基質(zhì)細(xì)胞中CYPl

3、Bl的誘導(dǎo)性表達(dá)顯著增多。這些結(jié)果表明乳腺基質(zhì)細(xì)胞具有生物活化DMBA的能力，并且提示乳腺上皮細(xì)胞中的P450酶對于保護(hù)乳腺基質(zhì)細(xì)胞對抗化學(xué)致癌劑介導(dǎo)的DNA損傷發(fā)揮了重要的作用。
　　 PHⅡ-7為本室以傳統(tǒng)中藥當(dāng)歸龍薈丸的有效成分的活性組分靛玉紅為模板，設(shè)計(jì)合成的具有較高活性和較低毒性的一種小分子化合物。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對PHⅡ-7體內(nèi)、體外抗腫瘤活性進(jìn)行了一些研究。用MTT法測定PHⅡ-7體外抗腫瘤譜，發(fā)現(xiàn)PHⅡ-7可抑制多種

4、人腫瘤細(xì)胞的生長，IC50介于0.35-18.68μmol/L之間。此外，PHⅡ-7對K562細(xì)胞的凋亡實(shí)驗(yàn)證明PHⅡ-7可誘導(dǎo)人敏感腫瘤細(xì)胞凋亡。以上結(jié)果證明：PHⅡ-7是一種有效的抗腫瘤新藥，具有較高的開發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景，因此，針對PHⅡ-7作用機(jī)制進(jìn)行深入探討，將有助于抗腫瘤機(jī)理的進(jìn)一步研究、新的抗腫瘤靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，以及抗腫瘤新藥的設(shè)計(jì)、研制與開發(fā)。
　　 為進(jìn)一步研究PHⅡ-7的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)主要運(yùn)用目前比較熱點(diǎn)的化學(xué)生

5、物學(xué)方法來探討PHⅡ-7在腫瘤細(xì)胞中的作用靶位。首先基于PHⅡ-7的定量結(jié)構(gòu)-藥效關(guān)系(Quantitative Structure-Activity Relationship，QSAR)，通過有機(jī)化學(xué)合成方法在非活性位點(diǎn)1-N位引入氨烷基側(cè)鏈，得到PHⅡ-7氨烷基側(cè)鏈衍生物，然后使PHⅡ-7氨烷基側(cè)鏈衍生物掛在溴化氰活化的瓊脂糖凝膠顆粒柱子上，用K562細(xì)胞總蛋白過柱子從而得到了兩個(gè)可與PHⅡ-7特異性結(jié)合的靶蛋白。在研究其中一個(gè)靶蛋