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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探討中國人群中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)及其活性產(chǎn)物聚腺苷二磷酸核糖(PAR)在前列腺癌及良性前列腺增生組織中的表達(dá)及意義;研究PARP-l特異性小分子干擾RNA(siRNA)對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌PC3細(xì)胞株增殖的影響及其作用機(jī)制,為前列腺癌的治療提供一個(gè)新的思路。
方法:
應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)并比較PARP-1和PAR在78例前列腺癌和49例前列腺增生組織中的表達(dá),分析
2、其在前列腺癌中與血清TPSA(TPSA>20及TPSA≤20)的關(guān)系,及其在高分化前列腺癌(Gleason評(píng)分≤6分)和低分化前列腺癌(Gleason評(píng)分≥8分)組織中的表達(dá)差異。同時(shí),設(shè)計(jì)合成3條PARP-l特異性siRNA序列,進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后,通過RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)其對(duì)PARP-l的干擾效果,篩選出最佳干擾效果的2條siRNA序列;通過單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)法檢測(cè)干擾PC3細(xì)胞內(nèi)源性PARP-l表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響,并檢測(cè)
3、細(xì)胞內(nèi)Akt及其下游GSK3β活化水平的變化。
結(jié)果:
1、PARP-1及PAR主要表達(dá)于前列腺癌及前列腺增生組織中細(xì)胞核中,幾乎不在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。PARP-1及PAR在前列腺癌組織中表達(dá)的陽性率及強(qiáng)陽性率均顯著高于前列腺增生組織(P<0.05)。
2、盡管PARP-1或PAR在前列腺癌患者PSA>20ng/ml組中的陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)高于PSA≤20ng/ml組,但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。同樣,PA
4、RP-1或PAR在前列腺癌患者Gleason評(píng)分≥8組中的陽性及強(qiáng)陽性表達(dá)高于Gleason評(píng)分≤6組,但亦并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
3、PARP-1特異性干擾序列siRNA-1706、siRNA-2003和siRNA-2907均可以明顯抑制PARP-l mRNA和蛋白的表達(dá)(P<0.05)。其中siRNA-1706的干擾效果最好,siRNA-2907的干擾效果最弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4、轉(zhuǎn)
5、染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003均可以明顯抑制PC3細(xì)胞增殖,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
5、轉(zhuǎn)染PARP-1的siRNA-1706和siRNA-2003在明顯抑制PARP-l表達(dá)的同時(shí),也明顯抑制Akt(Ser473位點(diǎn))及其下游 GSK3β(Ser9位點(diǎn))的磷酸化,但對(duì)總Akt1和GSK3β的表達(dá)并無明顯影響。
結(jié)論:
1、PARP-1及其活性產(chǎn)物PAR在前列腺癌組織
6、中的表達(dá)較良性前列腺增生組織中明顯增高,表明其可能在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
2、PARP-1及PAR與前列腺癌患者血清TPSA及Gleason評(píng)分無明顯相關(guān)性,但有隨著TPSA及Gleason評(píng)分增高而表達(dá)增高的趨勢(shì),表明其可能作為前列腺癌進(jìn)展的標(biāo)志物,但仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。
3、PARP-l特異性siRNA可以明顯干擾PC3細(xì)胞內(nèi)源性PARP-l的表達(dá)并抑制細(xì)胞增殖,該抑制作用與Akt的活化抑制以及其下游GSK
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