抗生素處理對(duì)桉樹和番茄內(nèi)生菌群落及內(nèi)生菌防治青枯病效果的影響.pdf

1、桉樹青枯病是由茄拉爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一種系統(tǒng)性維管束病害，也是一種具有毀滅性的土傳病害，給桉樹產(chǎn)業(yè)帶來了極大的損失。本研究通過抗生素對(duì)尾葉桉和番茄內(nèi)生細(xì)菌種群的影響探索桉樹抗病性與內(nèi)生細(xì)菌種群的關(guān)系，同時(shí)通過抗生素處理尾葉桉后接種拮抗細(xì)菌，探索其內(nèi)生細(xì)菌種群變化對(duì)拮抗菌應(yīng)用于桉樹青枯病防治的影響，為篩選和利用生防菌尋找更廣泛的途徑。
　　1、桉樹青枯病拮抗細(xì)菌的篩選和定殖力的測(cè)定
　

2、　利用枯草芽孢桿菌Y4和小麥無菌實(shí)生苗的內(nèi)生細(xì)菌(編號(hào)分別為CN181、G1、G2、G3、G4、G5、G6、 G7和G8)，采用平板對(duì)峙法和水培系統(tǒng)浸根法篩選對(duì)桉樹青枯病菌具有拮抗作用的菌株。結(jié)果表明:平板對(duì)峙法篩選試驗(yàn)中G1、G4、G6、G8、CN181和Y4在KB培養(yǎng)基上均可形成寬而透明的抑菌帶，其中菌株G6、CN181和Y4的抑菌效果最好，抑菌帶寬度均在30mm以上，對(duì)青枯病菌具有較好的拮抗作用。水培系統(tǒng)浸根法進(jìn)一步測(cè)定其對(duì)桉樹青

3、枯病的作用，結(jié)果顯示它們對(duì)桉樹青枯病均具有一定的防治效果，但Y4菌株處理后具有延遲青枯病發(fā)病時(shí)間的作用，且發(fā)病率均低于其他菌株，僅為26.7％;綜合以上兩種方法確定Y4菌株對(duì)青枯病菌抑制效果較好。
　　采用水培系統(tǒng)浸根法測(cè)定了Y4菌株在尾葉桉苗內(nèi)的定殖情況，結(jié)果表明，在Y4菌懸液處理1d后即可在尾葉桉內(nèi)檢測(cè)到該細(xì)菌，并且定殖量達(dá)到了3.17×105CFU·g-1，之后其定殖量逐漸減少，在第20d時(shí)依然可以檢測(cè)到7.84×104CF

4、U·g-1。表明Y4在尾葉桉苗內(nèi)前期定殖量大且迅速，在一定時(shí)間內(nèi)可以有效地定殖于尾葉桉內(nèi)，但在后期定殖力減弱。
　　2、抗生素處理對(duì)Y4菌株在尾葉桉內(nèi)的定殖和室內(nèi)生防效果的影響
　　利用抗生素處理尾葉桉實(shí)生苗后，研究其對(duì)Y4菌株在尾葉桉內(nèi)的定殖和室內(nèi)生防效果的影響。結(jié)果表明:在利福平、四環(huán)素、鏈霉素和氯霉素濃度分別為70、60、50和30mg·L-1時(shí)對(duì)尾葉桉苗不會(huì)造成傷害。室內(nèi)對(duì)Y4拮抗菌防治桉樹青枯病的測(cè)定結(jié)果表明，抗生

5、素處理后接種Y4菌株可以提高尾葉桉對(duì)桉樹青枯病的抗性，但各抗生素的作用表現(xiàn)不同，發(fā)病率最低的為利福平和四環(huán)素處理的尾葉桉?？股靥幚砦踩~桉后接種Y4菌株，第6d時(shí)在尾葉桉內(nèi)分離到的Y4菌落數(shù)量最多，且以利福平處理的最多。同時(shí)在土壤系統(tǒng)中Y4菌株定殖量變化的穩(wěn)定性較水培系統(tǒng)浸根處理的好，但隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，Y4菌株定殖量均逐漸較少。測(cè)定Y4菌株在尾葉桉不同部位的定殖時(shí)，發(fā)現(xiàn)在尾葉桉各部位中Y4菌落數(shù)量的分布規(guī)律呈遞增趨勢(shì)，即:葉＜莖＜根

6、。隨著處理時(shí)間的變化不同抗生素處理尾葉桉后對(duì)Y4菌株在其各部位定殖的影響不同，利福平和氯霉素處理均有利于Y4菌株在根、莖、葉各部位的定殖。鏈霉素和四環(huán)素處理尾葉桉第9d時(shí)，對(duì)Y4菌株在莖和葉部表現(xiàn)促進(jìn)作用，根部作用不明顯，其他處理時(shí)間對(duì)其定殖均表現(xiàn)抑制作用。
　　3.抗生素對(duì)番茄和尾葉桉內(nèi)生細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)變化與其抗病性的關(guān)系
　　以番茄和尾葉桉實(shí)生苗為試驗(yàn)材料，測(cè)定了3個(gè)濃度的利福平(20、40和60mg·L-1)對(duì)番茄植株內(nèi)

7、生細(xì)菌種類、群落數(shù)量和青枯病抗性的影響，以及不同種類的抗生素對(duì)尾葉桉的內(nèi)生細(xì)菌群落的影響。結(jié)果表明，4～5葉期番茄植株在利福平溶液濃度不超過60mg·L-1時(shí)生長(zhǎng)良好。各濃度利福平在不同處理時(shí)間內(nèi)對(duì)番茄植株內(nèi)生細(xì)菌群落產(chǎn)生了刺激或抑制作用，使番茄植株各部位內(nèi)生細(xì)菌的種類和數(shù)量出現(xiàn)了多樣性的變化。這些變化使番茄植株提高了其對(duì)青枯病菌的抗性，尤其是利福平40mg·L-1處理組在第15d時(shí)，接種青枯病菌的番茄植株發(fā)病率只有45.8％。

8、　　在尾葉桉正常生長(zhǎng)不受影響的情況下，各抗生素中利福平、四環(huán)素的最終處理濃度分別為70和80mg·L-1，鏈霉素和氯霉素為50mg·L-1。經(jīng)不同抗生素處理后，在不同的處理時(shí)間節(jié)點(diǎn)上尾葉桉苗內(nèi)生細(xì)菌群落受到不同程度的影響，其內(nèi)生細(xì)菌的種類和數(shù)量出現(xiàn)了多樣性的變化。在測(cè)定抗生素處理后尾葉桉抗病性時(shí)，發(fā)現(xiàn)尾葉桉在抗生素處理前期的發(fā)病率較后期的低，且在尾葉桉根、莖和葉部分離到的內(nèi)生細(xì)菌群落多樣性也較豐富，并以氯霉素處理后尾葉桉內(nèi)分離到的內(nèi)生細(xì)