柑橘及其近緣屬植物5SrDNA的FISH位點(diǎn)研究.pdf

1、柑橘因其巨大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)與文化影響力，使其在世界范圍類廣泛種植。由于其微弱的生殖障礙和多胚性，以及長(zhǎng)期的栽培歷史還有體細(xì)胞突變，這些造成柑橘分類極其困難。柑橘的中期染色體基本上都很短小，長(zhǎng)度僅在1-4μm之間，而且它們的形態(tài)特征十分相似，缺乏鑒別標(biāo)記，分類比較困難。
　　利用熒光原位雜交技術(shù)，能準(zhǔn)確把核酸序列定位在染色體上，結(jié)合傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)，為柑橘及其近緣屬植物在分子水平上對(duì)染色體的結(jié)構(gòu)有更加詳細(xì)的了解，同時(shí)為染色體識(shí)別和基因物

2、理定位等方面的進(jìn)一步研究提供了快速、準(zhǔn)確、有效的方法。本論文用5SrDNA作為探針，利用FISH技術(shù)，對(duì)柑橘屬及其近緣屬植物的5SrDNA位點(diǎn)進(jìn)行研究分析，以期所獲得的相關(guān)信息可以用于柑橘系統(tǒng)演化研究，以及為柑橘類植物染色體識(shí)別增加更多有效標(biāo)記。另外，也進(jìn)行了部分柑橘的二倍體與天然四倍體的5SrDNA位點(diǎn)差異分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)柑橘染色體制片及染色體原位雜交體系進(jìn)行了一系列優(yōu)化:染色體制片時(shí)不用火焰干燥，而是自然晾

3、干，降低對(duì)染色體的損傷;針對(duì)探針特性減少雜交時(shí)間和洗脫次數(shù)，使其快速簡(jiǎn)便有效，省時(shí)省力。
　　2.柑橘、金柑屬和枳屬16份材料的5SrDNA位點(diǎn)數(shù)目位點(diǎn)數(shù)目包含1、2、6三種情況，其中具2個(gè)位點(diǎn)的有13份材料。5SrDNA位點(diǎn)位置位于16份材料的體細(xì)胞染色體的第2、4、6、7、8、9號(hào)染色體上，尤其以位于7和8號(hào)染色體上的位點(diǎn)居多，7份材料5SrDNA位點(diǎn)位于8號(hào)染色體，5份材料5SrDNA位點(diǎn)位于7號(hào)染色體。除紅桔5SrDNA位

4、點(diǎn)位于2條染色體（6號(hào)和9號(hào)），枳5SrDNA位點(diǎn)位于4條染色體（2號(hào)、3號(hào)、8號(hào)和9號(hào)）外，其余具2個(gè)位點(diǎn)的材料其位點(diǎn)均位于一對(duì)同源染色體上。其中供試的柑橘屬植物13份材料染色體上有1-2雜交位點(diǎn)，除資陽(yáng)香橙和尤力克檸檬為1個(gè)位點(diǎn)，其余11份材料均具2個(gè)位點(diǎn)。具2個(gè)位點(diǎn)的其位點(diǎn)一般位于染色體短臂近端部位置，且處于一對(duì)同源染色體上。只有紅橘的兩個(gè)位點(diǎn)有所差異，一個(gè)位于一條染色體的短臂近端部，另一個(gè)位于另一條染色體的短臂中部。供試的金柑屬

5、2份材料，滑皮金柑和金彈都有2個(gè)位點(diǎn)，位點(diǎn)都位于染色體短臂端部，信號(hào)強(qiáng)度沒(méi)有明顯差異。供試枳屬材料有1份材料，熒光原位雜交結(jié)果顯示有6個(gè)位點(diǎn)，分別位于第2對(duì)、第8號(hào)和9號(hào)染色體上。3個(gè)位點(diǎn)染色體短臂端部、2個(gè)位點(diǎn)位于染色體短臂靠近著絲粒、1個(gè)位點(diǎn)位于一條染色體的隨體部分。
　　3.對(duì)柑橘屬的3個(gè)生物型的天然四倍體與其相應(yīng)二倍體的5SrDNA位點(diǎn)進(jìn)行了比較。其中紅江橙二倍體、化州橙二倍體的5SrDNA位點(diǎn)為2個(gè)，它們的天然四倍體有4