復(fù)方鄰苯二甲醛殺滅醫(yī)院感染菌效果及其殺菌機(jī)理研究.pdf

1、【目的】 研究復(fù)方鄰苯二甲醛對(duì)醫(yī)院感染菌的殺滅效果，并通過檢測(cè)MRSA中耐消毒劑基因qacA/B，比較有無該基因時(shí)消毒劑對(duì)其殺滅效果的差別以發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性菌株是否對(duì)復(fù)方鄰苯二甲醛產(chǎn)生抗性；通過測(cè)定漏出蛋白質(zhì)、DNA的含量初步探討復(fù)方鄰苯二甲醛對(duì)醫(yī)院感染菌的作用機(jī)理。 【方法】 1.實(shí)驗(yàn)方法 以耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林凝固酶陰性的葡萄球菌(MRCNS)、甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌(MS

2、SA)、產(chǎn)ESBLs(超廣譜β內(nèi)酰胺酶)的肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、陰溝腸桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、白色念珠菌、熱帶念珠菌等醫(yī)院感染菌為試驗(yàn)菌株，以復(fù)方鄰苯二甲醛為試驗(yàn)用消毒劑，在20±1℃條件下，進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)，懸液定量殺菌試驗(yàn)；運(yùn)用PCR法對(duì)MRSA進(jìn)行耐消毒劑基因qacA/B的檢測(cè)并對(duì)有無該基因的菌株分別進(jìn)行懸液定量殺菌試驗(yàn)；檢測(cè)菌藥混合液中漏出蛋白質(zhì)、DNA含量。 2.統(tǒng)計(jì)方法 懸液

3、定量殺菌試驗(yàn)中，以點(diǎn)計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)對(duì)照組和試驗(yàn)組的存活菌落數(shù)，分別進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，兩者相減，計(jì)算對(duì)數(shù)降低值。采用SPSS 13.0軟件，對(duì)復(fù)方鄰苯二甲醛殺菌及其影響因素試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，并用Excel2003作線圖分析。 【結(jié)果】 1.復(fù)方鄰苯二甲醛對(duì)微生物殺滅作用的研究含OPA100 mg/L、50mg/L、25 mg/L的復(fù)方鄰苯二甲醛溶液作用3min對(duì)肺炎克雷伯菌平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.77、3.53

4、、1.19；對(duì)銅綠假單胞菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.90、4.58、2.74；對(duì)熱帶念珠菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.78、2.94、 0.38。 含OPA50mg/L、25mg/L、12.5 mg/L的復(fù)方鄰苯二甲醛溶液作用3min對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.80、2.31、1.77；對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為7.16、3.56、1.34；對(duì)MRCNS的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.66、4.03、2.02：

5、對(duì)白色念珠菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為7.12、2.39、0.24；對(duì)陰溝腸桿菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為7.00、2.44、0.31；對(duì)MSSA的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為7.08、2.50、1.25。 含OPA50mg/L、25mg/L、12.5 mg/L的復(fù)方鄰苯二甲醛溶液作用5min對(duì)大腸埃希菌的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.87、3.70、1.89；對(duì)MRSA(qacA/B陽(yáng)性)的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為6.30、4.82、1.93；對(duì)MRS

6、A(qacA/B陰性)的平均殺滅對(duì)數(shù)值分別為5.77、3.98、2.09。 2.MRSA中耐消毒劑基因qacA/B的檢測(cè)及苯扎溴銨、單品鄰苯二甲醛、復(fù)方鄰苯二甲醛分別對(duì)陽(yáng)性、陰性菌株殺滅效果比較通過PCR從24株MRSA中檢出4株耐消毒劑基因qacA/B陽(yáng)性；250mg/L、125mg/L、62.5 mg/L的苯扎溴銨作用3min，對(duì)MRSA(qacA/B陽(yáng)性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為5.74、3.64、3.02，對(duì)MRSA(

7、qacA/B陰性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為7.38、5.74、4.04，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；50mg/L、25mg/L、12.5 mg/L的單品鄰苯二甲醛作用5min，對(duì)MRSA(qacA/B陽(yáng)性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為5.15、2.96、0.85，對(duì)MRSA(qacA/B陰性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為5.32、3.00、1.03，差別無顯著性(P>0.05)；50mg/L、25mg/L、12.5 mg/L的復(fù)方

8、鄰苯二甲醛作用5min，對(duì)MRSA(qacA/B陽(yáng)性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為6.30、4.82、1.93，對(duì)MRSA(qacA/B陰性)的平均殺滅對(duì)數(shù)降低值分別為5.77、3.98、2.09，差別有顯著性(P<0.05)，但結(jié)合線圖認(rèn)為沒有差別。 3.MRSA、產(chǎn)ESBLs(超廣譜13內(nèi)酰胺酶)的肺炎克雷伯菌、白色念珠菌經(jīng)復(fù)方鄰苯二甲醛作用后蛋白質(zhì)、DNA漏出情況。 各種試驗(yàn)菌經(jīng)含OPA100 mg/L、50mg/L

9、、25 mg/L、12.5 mg/L的復(fù)方鄰苯二甲醛溶液作用1min、3min、5 min、10 min、15 min后均未見有蛋白質(zhì)和DNA漏出。 【結(jié)論】 在20±1℃，復(fù)方鄰苯二甲醛可快速、高效滅活各種常見的醫(yī)院感染菌，包括攜帶耐消毒劑基因qacA/B的MRSA，雖對(duì)復(fù)方中的苯扎溴銨存在抗性，對(duì)復(fù)方鄰苯二甲醛卻不存在耐藥性；蛋白質(zhì)漏出試驗(yàn)、DNA漏出試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方鄰苯二甲醛并不是通過破壞菌體結(jié)構(gòu)導(dǎo)致內(nèi)容物漏出來滅