甜瓜細(xì)菌性果斑病菌菌株哈17A致病相關(guān)基因lysR的克隆.pdf

1、甜瓜細(xì)菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch of Melon簡(jiǎn)稱BFBM)是由燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N(Acidovoraxavenae SUbsp．citrulli Willems et al，1992)引起的一種病害，可以嚴(yán)重危害西、甜瓜的葉片和果實(shí)，造成西瓜和甜瓜的大量減產(chǎn)，是國(guó)際規(guī)定的檢疫性植物病害之一。目前，對(duì)該病原菌致病機(jī)制的研究鮮有報(bào)道。本研究從遺傳學(xué)角度初步研究了該病原微生物的致病相關(guān)基因，為進(jìn)一步研究該病

2、菌和宿主之間的互作提供了材料。 哈17A菌株為甜瓜的致病菌株，分離自新疆罹病甜瓜葉片。本研究運(yùn)用16SrDNA序列同源性分析、特異性引物PCR和全細(xì)胞脂肪酸分析的方法，將菌株哈17A鑒定為A．a(chǎn)venae subsp．citrulli，同時(shí)對(duì)其部分生物學(xué)特性也進(jìn)行了初步分析。 本研究利用三親雜交的方法將帶有抗卡那標(biāo)記的Tn5轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)入甜瓜果斑病菌哈17A的細(xì)胞中，轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入到哈17A基因組DNA上，獲得突變體庫。利用

3、“葉片離體篩選法”篩選致病性減弱的突變體，從2000多個(gè)突變體中篩選到得到致病性明顯減弱的突變體5個(gè)。其中，通過“鳥槍法”成功克隆到突變體W-46的Tn5例翼序列。根據(jù)測(cè)序結(jié)果BLAST比對(duì)得知，該基因的產(chǎn)物與A．a(chǎn)venae subsp．citrulli AAC00-1中LysR家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白(LTTR)LysR的相似性達(dá)到100％，我們命名該基因?yàn)閘ysR。根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增包含目標(biāo)基因的一段序列，構(gòu)建互補(bǔ)載體，對(duì)突變菌

4、株W-46進(jìn)行功能互補(bǔ)，得到了致病力恢復(fù)的互補(bǔ)菌株C-46，證明lysR基因與菌株哈17A的致病性密切相關(guān)。另外，lusR與哈17A菌株中其他致病性相關(guān)基因的關(guān)系有待進(jìn)一步驗(yàn)證。 本研究從傳統(tǒng)的植物病理學(xué)入手，建立了篩選燕麥?zhǔn)人峋虏【旯?7A突變體的篩選體系--離體葉片篩選法，優(yōu)化了研究燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N致病性的遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，為燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N的致病性分子遺傳機(jī)制的研究提供了研究基礎(chǔ)，具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。