miR-139-5p在高糖內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用.pdf

1、目的:探討miR-139-5p在高糖誘導(dǎo)下內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的變化及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的調(diào)控作用。
　　方法:1.體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)，利用microRNA實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)持續(xù)的高糖(30mmol/L)刺激下miR-139-5p表達(dá)水平在7天內(nèi)的變化情況，與在正常糖(5 mmol/L)下培養(yǎng)的HUVECs miR-139-5p表達(dá)水

2、平對(duì)比;2.通過(guò)miRNA mimic或miRNA Inhibitor外源性的上調(diào)或下調(diào)HUVECs miR-139-5p表達(dá)水平，用劃痕實(shí)驗(yàn)和tranwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移能力，用CCK-8試劑盒檢測(cè)增殖能力，通過(guò)檢測(cè)HUVECs的Caspase3活性檢測(cè)凋亡情況，并用體外成管試劑盒檢測(cè)成管能力;3.通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)IGF-1R、pIGF-1R、Akt、pAkt、VEGFA、Erk1/2及pERK1/2蛋白表達(dá)水

3、平，以確定miR-139-5p的靶蛋白及其信號(hào)通路。
　　結(jié)果:1.miR-139-5p表達(dá)隨高糖作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增高(P＜0.05)，至第7天時(shí)其表達(dá)升高明顯，是正常對(duì)照組的6倍。而在等滲的甘露醇組未觀察到miR-139-5p表達(dá)水平變化(P＞0.05)。2.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)顯示，miR-139-5p高表達(dá)時(shí)細(xì)胞遷移能力被抑制(P＜0.05)，而抑制miR-139-5p表達(dá)時(shí)細(xì)胞遷移增強(qiáng)(P＜0.05

4、);上調(diào)miR-139-5p表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖(P＜0.05); miR-139-5p表達(dá)上調(diào)48小時(shí)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響(P＞0.05)，而96小時(shí)后顯示內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加(P＜0.05)，下調(diào)miR-139-5p表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡降低(P＜0.05); miR-139-5p對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞排列成線長(zhǎng)度、形成血管芽數(shù)量等檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞成管能力的指標(biāo)均有抑制作用(P＜0.05)。3.外源性的上調(diào)或下調(diào)miR-139-5p后，IGF-1R蛋白表達(dá)均

5、隨之下降或升高;IGF-1R信號(hào)通路下游的Akt水平變化不明顯(P＞0.05)，而其活化形式pAkt蛋白表達(dá)隨之變化(P＜0.05); miR-139-5p對(duì)胞內(nèi)VEGF表達(dá)有抑制作用(P＜0.05);但miR-139-5p表達(dá)改變時(shí)，ERK1/2及pERK表達(dá)均無(wú)明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在高糖作用下miR-139-5p表達(dá)增加，miR-139-5p通過(guò)抑制IGF-1R/Akt/通路及VEGF的表達(dá)，